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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于蛋白引物PCR问题
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

[交流] 关于蛋白引物PCR问题

一些相关文献中，蛋白引物PCR时退火温度不但不遵守Tm减去5的一般引物设计规律，有的甚至比引物Tm值还高上5度，请问一下这个有什么影响么？还是都是通过温度梯度摸索出来的呢？

设计了一对蛋白引物，Tm值为72.82，这个Tm值目前为止见过最高的一个。GC含量为52.17%

[ Last edited by 蓝色基因 on 2009-4-7 at 18:15 ]
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1楼 2009-04-07 17:02:19
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
350784478(金币+1):谢谢
各个软件Tm的计算方法并不一样
我倒是建议更具引物合成单上写的50mM Na+强度下的Tm值加3~5度作为退火温度，每次我都能做出来
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2楼2009-04-07 17:08:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
=v=另外，没有所谓的“蛋白质”引物……非常不专业的说法……
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3楼2009-04-07 17:09:26
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
非常不好意思！已经改为蛋白引物。

我用的是生工合成的引物，引物说明书上提供的是 1 M Na+的Tm值，为88.22，请问
该怎么换算成你说的50 mM再加上3-5度呢。

再次感谢。
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4楼2009-04-07 18:18:47
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
没有其他做蛋白的兄弟们，大家顶一下。
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5楼2009-04-08 13:26:08
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allen8368

木虫 (正式写手)
蛋白引物是什么东东？
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慢慢的认识你，再慢慢的忘记你...........
6楼2009-04-08 15:55:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
呃……居然只有1M Na+的数据，那太诡异了……
只好根据primer 5当初设计出来的减3~5度的经验了
或者输入到oligo analyzer去分析，google一下
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7楼2009-04-08 16:10:11
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
我也有点懵了，从来没听说过蛋白引物，你是pcr吗？pcr蛋白？应该是编码蛋白基因序列的引物吧
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会当凌绝顶，一览众山小
8楼2009-04-08 16:33:52
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
唉，又被看出来了。

半路出家做蛋白看来真的很难啊。

“编码蛋白基因序列的引物”！
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9楼2009-04-08 21:54:58
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