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simonsong3

新虫 (小有名气)

[求助] 细胞提取蛋白简易方法

今天从隔壁实验室听到他们从细胞中提取蛋白的方法很简单,直接将培养皿中培养基吸掉,pbs洗一遍,直接往皿中滴加适量1xSDS loading,收到EP管里100℃煮20min即可点样跑胶。他们做的western质量还不错,但是由于没尝试过,加上也没见过这种protocol,所以不敢轻易尝试,不知道有没有大神了解这种方法,和传统lysis buffer裂解收蛋白的优劣对比如何。

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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

这是热裂解,不知道定量怎么做

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2楼2018-09-05 20:37:07
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15737926255

银虫 (正式写手)

3楼2018-09-05 21:34:12
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simonsong3

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by choujiaoqi at 2018-09-05 20:37:07
这是热裂解,不知道定量怎么做

他们好像根据细胞量来加loading,完全凭借经验,关键是内参还挺齐

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4楼2018-09-05 23:15:53
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simonsong3

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 15737926255 at 2018-09-05 21:34:12
第一次听说不加ripa的

我也是

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5楼2018-09-05 23:16:05
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by simonsong3 at 2018-09-05 23:15:53
他们好像根据细胞量来加loading,完全凭借经验,关键是内参还挺齐
...

那就是经验了,你做多了以后也是可以的

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6楼2018-09-06 08:21:27
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)

引用回帖:
5楼: Originally posted by simonsong3 at 2018-09-05 23:16:05
我也是
...

sds 相当于碱裂解,然后加热以后进一步裂解,你也可以用称重,把细胞刮下来,称重的。松散的微量组织也可以用这个方法。

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7楼2018-09-06 08:23:25
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simonsong3

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by choujiaoqi at 2018-09-06 08:23:25
sds 相当于碱裂解,然后加热以后进一步裂解,你也可以用称重,把细胞刮下来,称重的。松散的微量组织也可以用这个方法。
...

好的,多谢

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8楼2018-09-06 09:00:48
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

我们实验室一般也是这样做。比如6孔板,每个孔加300μ升 loading,100度裂解10分钟。在最开始铺细胞的时候一般大家都是要求每孔相同细胞数,一般细胞生长速度彼此间差异不是非常明显的前提下,最后收的蛋白跑WB都比较齐,当然,跑一次看看,要是不齐就重新调整跑一次。也可以先粗略定个量再跑

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9楼2018-09-07 08:53:19
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simonsong3

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by maoniuniu at 2018-09-07 08:53:19
我们实验室一般也是这样做。比如6孔板,每个孔加300μ升 loading,100度裂解10分钟。在最开始铺细胞的时候一般大家都是要求每孔相同细胞数,一般细胞生长速度彼此间差异不是非常明显的前提下,最后收的蛋白跑WB都比 ...

好的,多谢,下次我也尝试一下

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10楼2018-09-07 13:38:43
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