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一直找不到亚克隆 已有4人参与
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本人从今年三月开始就一直在做亚克隆的实验，但是一直没有找到。阳性克隆部分酶切切取2-4k片段和制备好的载体用T4DNA连接酶连接，然后电转，转化后涂板子。培养基里加有抗生素，照理说长不出几个克隆，可是每次涂完板子就有100-200个单菌落，从中任意挑取几个单菌落摇菌，出现过以下几种情况：1.摇不浓 2.摇的浓提质粒跑胶检测，发现一管质粒都提不出来 3.摇的浓提质粒跑胶检测，15管里提出1管，做双酶切验证发现不是我要的亚克隆。 重复了好多好多次，不知道是哪一步出了问题，请高手指点一下，不胜感激！ 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2018-09-03 20:00:58
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5楼2018-09-04 21:22:32
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哈哈，微生物的实验都很玄乎，说不出个所以然。这个亚克隆我已经做了五个月了，阳性克隆质粒的部分酶切还有载体的制备都没有问题，连接的话也是按照t4DNA连接酶的说明书来设置反应体系的量的，照理说也没问题。感受态细胞也换了有三批了。就一直重复不出来。好玄乎。我最近在想是不是用的培养基有问题，不应该用LB的 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2018-09-04 22:16:35
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