24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3883  |  回复: 25

apple53

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
每一步具体说了才知道原因 不然那么多关键点

发自小木虫Android客户端
21楼2018-09-06 21:57:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

前行的璐

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近在构载体,得到的浓度20ng/ul,两管回收的,T4连接酶,试了两次也没有连上,
22楼2018-09-07 10:03:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请把你的载体测序验证一下MCS区看看,感觉你这个载体不太对,可能对了其中某一个酶
23楼2018-09-07 14:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐是选择

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by macgray11 at 2018-09-05 08:45:46
无缝克隆的效率是要比连接反应高的,但是需要重新设计引物;如果没有无缝克隆酶的话,我建议先验证一下载体,确认载体没有问题,然后再酶切;同时加大片段和载体的酶切量,建议载体和片段都切至少1ug,我一般是用的 ...

连接的基因是PGM,一开始是酶切1ug,这样的话酶切不完全啊,后来就在不断的降低酶切的量,最后降到50ng,对照板上的单菌落是少了,但是实验板上还是没有验证出阳性菌

发自小木虫Android客户端
24楼2018-09-08 11:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐是选择

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
23楼: Originally posted by a13515517892 at 2018-09-07 14:00:08
请把你的载体测序验证一下MCS区看看,感觉你这个载体不太对,可能对了其中某一个酶

那难道是载体出了问题?

发自小木虫Android客户端
25楼2018-09-08 11:13:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guhe

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
通过你的描述,我认为有两种可能:1:这两种限制性内切酶用的时间太长了,将质粒切不完全,新购买两支限制性内切酶;2:引物两端的酶切位点是否加有保护碱基,只有加有保护碱基后酶才能识别出目的片段的酶切位点。
26楼2018-09-11 11:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 快乐是选择 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见