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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 如何验证一个蛋白对另一个蛋白有抑制或者激活作用
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 如何验证一个蛋白对另一个蛋白有抑制或者激活作用 已有2人参与

各位大神：我现在发现一个SUMO E3连接酶和一个转录因子有互作，但我想知道这种互作到底是增强了他的转录活性还是抑制还是没有明显作用，要通过什么实验来做？是不是那种需要报告基因的实验？求解答。
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1楼 2018-08-27 17:40:32
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-28 08:10:51
lwk5716: 金币+1 2018-08-28 12:29:43
对，reporter assay是研究转录活性的黄金标准
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
2楼2018-08-27 18:58:39
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
报告基因是不是一般一个蛋白，另外一个是启动子，那两个蛋白，再加一个启动子，三个可以吗？

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3楼2018-08-28 12:29:30
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lwk5716: 金币+1 2018-08-30 12:13:57
lwk5716: 金币+5 2018-08-30 12:14:29
引用回帖:
3楼: Originally posted by lwk5716 at 2018-08-28 06:29:30
报告基因是不是一般一个蛋白，另外一个是启动子，那两个蛋白，再加一个启动子，三个可以吗？

没问题。
比如你的问题，假设报告基因是GFP，也可以是luciferase，Neo，反正不重要。重要的是promoter，那才是和转录因子（TF）互作的。你想知道SUMO E3是加强了还是减弱了TF的功能，看GFP变强或减弱了就好。
总结就是，对照设计好就没有问题。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
4楼2018-08-28 21:50:46
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1937mcq

金虫 (初入文坛)

努力后生
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lwk5716: 金币+1 2018-08-30 12:14:08
lwk5716: 金币+2 2018-08-30 12:14:20
转录因子对蛋白的作用，那应该是作用于启动子，抑制或者促进启动子的活性，我们实验室是用含有GUS和LUC报告基因的载体，采用基因枪轰击或者原生质体转化的实验来进行的，然后测LUC报告基因的活性。当然含有其他报告基因的载体一样可以，只要能把这种互作的结果变成可以检测的数据就都可以。
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心若向阳，无谓悲伤！
5楼2018-08-29 16:04:06
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 1937mcq at 2018-08-29 16:04:06
转录因子对蛋白的作用，那应该是作用于启动子，抑制或者促进启动子的活性，我们实验室是用含有GUS和LUC报告基因的载体，采用基因枪轰击或者原生质体转化的实验来进行的，然后测LUC报告基因的活性。当然含有其他报告 ...

谢谢您

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6楼2018-08-30 12:15:24
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lwk5716

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by drwhoknowss at 2018-08-28 21:50:46
没问题。
比如你的问题，假设报告基因是GFP，也可以是luciferase，Neo，反正不重要。重要的是promoter，那才是和转录因子（TF）互作的。你想知道SUMO E3是加强了还是减弱了TF的功能，看GFP变强或减弱了就好。
总 ...

好，感谢。

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7楼2018-08-30 12:15:44
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皮皮虾子

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
哈哈哈 我也做SUMO 化
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哥，就是我
8楼2019-09-19 15:32:04
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小小乌贼

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
体外无细胞讲解实验

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9楼2020-03-17 06:33:33
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