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wdd608

新虫 (初入文坛)

[求助] 乙醇浓缩DNA已有2人参与

用试剂盒提出来DNA之后,浓度很低,于是通过乙醇沉淀DNA的方法来浓缩DNA,想让DNA浓度提高,这是步骤:
1.按照待沉淀溶液体积的1/10添加3M的NaAc溶液(醋酸钠),同时按照溶液体积的2-2.5倍添加无水乙醇,充分振荡混匀。(1ml溶液加入100ulNaAC溶液和2-2.5ml无水乙醇,顺序不可颠倒)
2.-20静置20min(可长期保存)
3.12000rpm 离心 20min
4.去上清,加入70%乙醇1ml洗涤(沉淀多可以增加体积),稍加振荡后离心,12000rpm,10min
5.重复(步骤4)2-3次
6.去上清,瞬时离心将残余70%乙醇甩到管底,移液器吸净上清
7.开盖风干5min,注意没有醇味即可,不要过干
8.纯水适当体积溶解(尽量少),注意:很多沉淀会附在管壁,注意溶解时反复吹打相应扇面的管壁。
但是第3步的时候根本没有沉淀,硬着头皮做下来,检测发现就只有水,浓度在0.3左右,请问是怎么回事?
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602059625

金虫 (知名作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:23:54
要浓缩,真空抽干就可以,
乙醇沉淀也会损失一点,通常要DNA浓度较高才用乙醇

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2楼2018-08-27 01:54:40
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602059625

金虫 (知名作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:24:22
引用回帖:
4楼: Originally posted by wdd608 at 2018-08-29 16:33:36
真空抽干也看到别人提过,具体操作是什么呢?是不是必须得有个仪器。...

真空干燥有专门的仪器,
没有仪器就土办法,就是时间长一些
放到密闭容器里,里面放变色硅胶吸湿
拿电吹风吹
放超净台开口处吹

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7楼2018-08-29 21:40:12
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602059625

金虫 (知名作家)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wdd608 at 2018-08-30 10:46:29
用这些办法会不会损失很多DNA,还有感觉会被污染吧。。。...

这些办法我都没用过,
超净台吹出来的风应该是干净的,
也不知道的的DNA浓度到底有多底

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9楼2018-08-30 11:18:33
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602059625

金虫 (知名作家)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wdd608 at 2018-08-30 10:46:29
用这些办法会不会损失很多DNA,还有感觉会被污染吧。。。...

DNA还是不那么容易降解的,PCR 95度都没事

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10楼2018-08-30 11:21:01
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