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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 乙醇浓缩DNA
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wdd608

新虫 (初入文坛)

[求助] 乙醇浓缩DNA已有2人参与

用试剂盒提出来DNA之后，浓度很低，于是通过乙醇沉淀DNA的方法来浓缩DNA，想让DNA浓度提高，这是步骤：
1．按照待沉淀溶液体积的1/10添加3M的NaAc溶液（醋酸钠），同时按照溶液体积的2－2.5倍添加无水乙醇，充分振荡混匀。（1ml溶液加入100ulNaAC溶液和2－2.5ml无水乙醇，顺序不可颠倒）
2．－20静置20min（可长期保存）
3．12000rpm 离心 20min
4．去上清，加入70％乙醇1ml洗涤（沉淀多可以增加体积），稍加振荡后离心，12000rpm，10min
5．重复（步骤4）2－3次
6．去上清，瞬时离心将残余70％乙醇甩到管底，移液器吸净上清
7．开盖风干5min，注意没有醇味即可，不要过干
8．纯水适当体积溶解（尽量少），注意：很多沉淀会附在管壁，注意溶解时反复吹打相应扇面的管壁。
但是第3步的时候根本没有沉淀，硬着头皮做下来，检测发现就只有水，浓度在0.3左右，请问是怎么回事？
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1楼2018-08-26 16:14:35
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602059625

金虫 (知名作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:23:54
要浓缩，真空抽干就可以，
乙醇沉淀也会损失一点，通常要DNA浓度较高才用乙醇

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2楼2018-08-27 01:54:40
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普通回帖

WEEEEEE

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定你的菌没有被污染吗
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3楼2018-08-27 12:19:17
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wdd608

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 602059625 at 2018-08-27 01:54:40
要浓缩，真空抽干就可以，
乙醇沉淀也会损失一点，通常要DNA浓度较高才用乙醇

真空抽干也看到别人提过，具体操作是什么呢？是不是必须得有个仪器。
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4楼2018-08-29 16:33:36
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balalalabala

新虫 (小有名气)
冷冻干燥试一试，就是需要有仪器
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5楼2018-08-29 19:21:42
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wdd608

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by balalalabala at 2018-08-29 19:21:42
冷冻干燥试一试，就是需要有仪器

冷冻干燥？？？
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6楼2018-08-29 19:55:33
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602059625

金虫 (知名作家)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-08-31 08:24:22
引用回帖:
4楼: Originally posted by wdd608 at 2018-08-29 16:33:36
真空抽干也看到别人提过，具体操作是什么呢？是不是必须得有个仪器。...

真空干燥有专门的仪器，
没有仪器就土办法，就是时间长一些
放到密闭容器里，里面放变色硅胶吸湿
拿电吹风吹
放超净台开口处吹

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7楼2018-08-29 21:40:12
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wdd608

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 602059625 at 2018-08-29 21:40:12
真空干燥有专门的仪器，
没有仪器就土办法，就是时间长一些
放到密闭容器里，里面放变色硅胶吸湿
拿电吹风吹
放超净台开口处吹
...

用这些办法会不会损失很多DNA，还有感觉会被污染吧。。。
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8楼2018-08-30 10:46:29
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602059625

金虫 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wdd608 at 2018-08-30 10:46:29
用这些办法会不会损失很多DNA，还有感觉会被污染吧。。。...

这些办法我都没用过，
超净台吹出来的风应该是干净的，
也不知道的的DNA浓度到底有多底

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9楼2018-08-30 11:18:33
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602059625

金虫 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wdd608 at 2018-08-30 10:46:29
用这些办法会不会损失很多DNA，还有感觉会被污染吧。。。...

DNA还是不那么容易降解的，PCR 95度都没事

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10楼2018-08-30 11:21:01
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