24小时热门版块排行榜    

查看: 588  |  回复: 3
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

gxj071084

铁虫 (初入文坛)

[交流] 乳酸菌电转化

在做乳酸菌转化时,将PMG36e质粒转到副干酪乳杆菌,在抗性平板中长了(培养了四天),接到含同样终浓度抗生素的液体培养基中,有的不长,有的长了,但提完质粒1%跑胶,什么都没有!!,到底是问什么呢?谢谢,再就是乳酸菌的电转化应注意什么,筛选的时候注意什么?

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:20 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snow889

在大肠杆菌内的拷贝数相对要高一些,并且大肠杆菌也易操作。我觉得你可以试试提高质粒浓度。
我没有做过干酪乳酸杆菌的电转化,我觉得最关键的是感受态的制备。转化子的筛选,我一般都是:抽提质粒,PCR阳性的再重新转入大肠杆菌进一步鉴定。
好运!
4楼2009-04-16 02:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

snow889

★ ★
gxj071084(金币+1):谢谢参与
gxj071084(金币+1,VIP+0):谢谢,再就是乳酸菌的电转化应注意什么,筛选的时候注意什么? 4-7 21:30
PMG36e属于低拷贝质粒,抽提后直接电泳不一定能看到质粒条带,可以用PCR检测,或者也可以把抽提的质粒重新转入大肠杆菌进行鉴定
2楼2009-04-04 03:57:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gxj071084

铁虫 (初入文坛)

谢谢啊,从新转入大肠杆菌,提完质粒跑胶不也是很难检测吗?
在就是用EcoR1酶切两个小时,10微升体系,按说明书加,最后全点上,结果没有片段。是不是单拷贝的质粒应当做些调整,怎样做?谢谢
3楼2009-04-12 16:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 5/250 2026-08-17 16:38 by CBFiACZS7HAK
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 3/150 2026-08-17 16:35 by CBFiACZS7HAK
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6GojgJvkDudM 2026-08-16 7/350 2026-08-17 16:14 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 7/350 2026-08-17 16:11 by Vivilian
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 13:49 by EYK67XJMj64E
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见