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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 乳酸菌电转化
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gxj071084

铁虫 (初入文坛)

[交流] 乳酸菌电转化

在做乳酸菌转化时，将PMG36e质粒转到副干酪乳杆菌，在抗性平板中长了（培养了四天），接到含同样终浓度抗生素的液体培养基中，有的不长，有的长了，但提完质粒1%跑胶，什么都没有！！，到底是问什么呢？谢谢，再就是乳酸菌的电转化应注意什么，筛选的时候注意什么？

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:20 ]
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1楼 2009-04-03 21:26:49
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snow889

在大肠杆菌内的拷贝数相对要高一些，并且大肠杆菌也易操作。我觉得你可以试试提高质粒浓度。
我没有做过干酪乳酸杆菌的电转化，我觉得最关键的是感受态的制备。转化子的筛选，我一般都是：抽提质粒，PCR阳性的再重新转入大肠杆菌进一步鉴定。
好运！
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4楼2009-04-16 02:18:36
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snow889

★ ★
gxj071084(金币+1):谢谢参与
gxj071084(金币+1,VIP+0):谢谢，再就是乳酸菌的电转化应注意什么，筛选的时候注意什么？ 4-7 21:30
PMG36e属于低拷贝质粒，抽提后直接电泳不一定能看到质粒条带，可以用PCR检测，或者也可以把抽提的质粒重新转入大肠杆菌进行鉴定
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2楼2009-04-04 03:57:24
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gxj071084

铁虫 (初入文坛)
谢谢啊，从新转入大肠杆菌，提完质粒跑胶不也是很难检测吗？
在就是用EcoR1酶切两个小时，10微升体系，按说明书加，最后全点上，结果没有片段。是不是单拷贝的质粒应当做些调整，怎样做？谢谢
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3楼2009-04-12 16:03:45
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