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gxj071084

铁虫 (初入文坛)

[交流] 乳酸菌电转化

在做乳酸菌转化时,将PMG36e质粒转到副干酪乳杆菌,在抗性平板中长了(培养了四天),接到含同样终浓度抗生素的液体培养基中,有的不长,有的长了,但提完质粒1%跑胶,什么都没有!!,到底是问什么呢?谢谢,再就是乳酸菌的电转化应注意什么,筛选的时候注意什么?

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:20 ]
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snow889

★ ★
gxj071084(金币+1):谢谢参与
gxj071084(金币+1,VIP+0):谢谢,再就是乳酸菌的电转化应注意什么,筛选的时候注意什么? 4-7 21:30
PMG36e属于低拷贝质粒,抽提后直接电泳不一定能看到质粒条带,可以用PCR检测,或者也可以把抽提的质粒重新转入大肠杆菌进行鉴定
2楼2009-04-04 03:57:24
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gxj071084

铁虫 (初入文坛)

谢谢啊,从新转入大肠杆菌,提完质粒跑胶不也是很难检测吗?
在就是用EcoR1酶切两个小时,10微升体系,按说明书加,最后全点上,结果没有片段。是不是单拷贝的质粒应当做些调整,怎样做?谢谢
3楼2009-04-12 16:03:45
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snow889

在大肠杆菌内的拷贝数相对要高一些,并且大肠杆菌也易操作。我觉得你可以试试提高质粒浓度。
我没有做过干酪乳酸杆菌的电转化,我觉得最关键的是感受态的制备。转化子的筛选,我一般都是:抽提质粒,PCR阳性的再重新转入大肠杆菌进一步鉴定。
好运!
4楼2009-04-16 02:18:36
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