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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组蛋白纯化问题
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手

[交流] 重组蛋白纯化问题

请教各位虫友个问题：
采用HIS-TAG标签纯化重组蛋白，缓冲溶液中的咪唑一定要用脱盐柱洗脱吗？
也就是是不是一定要经过脱盐的步骤？不脱盐的话对酶的纯度有影响（就是电泳图上是否有杂带？）还是对酶的活力有影响？
谢谢各位的指教
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1楼 2009-04-03 09:44:03
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
不一定啊，看你下一步实验有没有要求你脱咪唑了。而且脱盐不一定就是把盐全部脱了，没有盐，蛋白不好溶解的。再者，脱咪唑方法很多，不见的就是脱盐（其实脱盐麻烦），透析、超滤都是很好用的方法。咪唑对酶的影响因酶而异。有的升高，有的降低，有的不变，甚至还有一些导致沉淀或者增容。咪唑是小分子，不可能影响酶的纯度，不然的话怎么可能脱盐去除？
做实验之前，好好看下原理在这样就不会糊涂，会更了解你的实验，也就能够分析出来错误或者正确的原因。
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For my life！
2楼2009-04-03 11:18:07
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2009-4-3 11:18:
不一定啊，看你下一步实验有没有要求你脱咪唑了。而且脱盐不一定就是把盐全部脱了，没有盐，蛋白不好溶解的。再者，脱咪唑方法很多，不见的就是脱盐（其实脱盐麻烦），透析、超滤都是很好用的方法。咪唑对酶的影响 ...

呵呵，谢谢啊，因为我们不是专门做生物的，而是做环境的，那么酶纯化这块懂得就不是特别多了，非常感谢
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3楼2009-04-03 14:17:56
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jasco

木虫 (正式写手)
透析就好了
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4楼2009-04-03 16:40:14
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anik

银虫 (正式写手)
按照Ni柱的实验说明来做就可以了，讲的很详细的。
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5楼2009-04-03 16:50:54
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2009-4-3 16:40:
透析就好了

呵呵，非常感谢，就是怕透析会把辅基和酶分离，从而使酶失去活性，不知道存不存在这种可能？
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6楼2009-04-03 19:26:37
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zh1987hs

金虫 (著名写手)

分子模拟新手
引用回帖:
Originally posted by anik at 2009-4-3 16:50:
按照Ni柱的实验说明来做就可以了，讲的很详细的。

哈哈，谢谢指教，就是因为脱盐柱坏了又不想耽误实验所以想问问
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7楼2009-04-03 19:27:32
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