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zh1987hs

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[交流] 重组蛋白纯化问题

请教各位虫友个问题：
采用HIS-TAG标签纯化重组蛋白，缓冲溶液中的咪唑一定要用脱盐柱洗脱吗？
也就是是不是一定要经过脱盐的步骤？不脱盐的话对酶的纯度有影响（就是电泳图上是否有杂带？）还是对酶的活力有影响？
谢谢各位的指教

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1楼 2009-04-03 09:44:03

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winter_gates

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不一定啊，看你下一步实验有没有要求你脱咪唑了。而且脱盐不一定就是把盐全部脱了，没有盐，蛋白不好溶解的。再者，脱咪唑方法很多，不见的就是脱盐（其实脱盐麻烦），透析、超滤都是很好用的方法。咪唑对酶的影响因酶而异。有的升高，有的降低，有的不变，甚至还有一些导致沉淀或者增容。咪唑是小分子，不可能影响酶的纯度，不然的话怎么可能脱盐去除？
做实验之前，好好看下原理在这样就不会糊涂，会更了解你的实验，也就能够分析出来错误或者正确的原因。

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For my life！

2楼2009-04-03 11:18:07

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引用回帖:

Originally posted by winter_gates at 2009-4-3 11:18:
不一定啊，看你下一步实验有没有要求你脱咪唑了。而且脱盐不一定就是把盐全部脱了，没有盐，蛋白不好溶解的。再者，脱咪唑方法很多，不见的就是脱盐（其实脱盐麻烦），透析、超滤都是很好用的方法。咪唑对酶的影响 ...

呵呵，谢谢啊，因为我们不是专门做生物的，而是做环境的，那么酶纯化这块懂得就不是特别多了，非常感谢

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3楼2009-04-03 14:17:56

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