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robot551

金虫 (正式写手)

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[交流] 求救：新配的考马斯亮蓝溶液咋呈深蓝色？

用考马斯亮蓝G－250法测蛋白质浓度，正常的考马斯亮蓝溶液是棕褐色，与蛋白质作用后显蓝色，但我配出来的考马斯亮蓝溶液却是蓝色的，根本不能用。
我把容量器和试剂瓶等重新洗了一遍，再配制仍然如此。我的配方及配制方法都是正确的。考马斯亮蓝G-250 100mg先溶于50mL95%乙醇中，加100毫升85%磷酸，去离子水稀释到1升
在百度和google里查了下，有的说可能的原因是器皿被蛋白质污染了，但我觉得这种可能性不大。
不知何故，实验因此而停下来了。求救于各位虫子帮忙分析分析，有没有遇到过同样的问题，是什么原因导致的，怎么解决这个问题？？
谢谢了，急啊！！

[ Last edited by robot551 on 2009-4-4 at 08:46 ]

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我们微笑，想念，咫尺天涯……

1楼 2009-04-02 20:32:59

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无效神

金虫 (小有名气)

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★
robot551(金币+1,VIP+0):这些知识以前都不知道呢，仁兄解释的深刻，学习了！ 4-4 08:48

再看看这个详细的说明吧
R250中的R代表Red，偏红，R250属于慢染，脱色脱的完全，主要用于电泳染色
λmax=560―590nm.染色灵敏度比氨基黑高5倍.尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色.但蛋白质浓度超出一定范围时,对高浓度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析时要注意.

G250中的G就是Green，偏绿，G250属于快染，脱色脱的不彻底，主要用于蛋白测定
比考马斯亮蓝R250多二个甲基.;λmax=590―610nm.染色灵敏度不如R250,但比氨基黑高3倍.优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体,能选择地染色蛋白而几乎无本底色.所以常用于需要重复性好和稳定的染色,适于作定量分析.

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无所谓

14楼2009-04-03 16:44:12

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我是我2082

木虫 (职业作家)

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★
robot551(金币+1,VIP+0):我已经百度和GOOGLE了，这个我看到过。不是问题所在，谢谢关注 4-2 21:14

我在Google上找到的，你可以照下面的试试下，看还有没有你所描述的情况

染色液配制: 1 mol/ L 盐酸溶液(A) ,1 g/ L CBB G250 溶液(B) ; 应用时用1 ml A 液和15 ml B 液混合加水至1 L , 搅拌混匀。

注意，关键所在是应用的时候再混合，不要配好等着染色。

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2楼2009-04-02 20:47:50

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