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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求救：新配的考马斯亮蓝溶液咋呈深蓝色？
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robot551

金虫 (正式写手)

[交流] 求救：新配的考马斯亮蓝溶液咋呈深蓝色？

用考马斯亮蓝G－250法测蛋白质浓度，正常的考马斯亮蓝溶液是棕褐色，与蛋白质作用后显蓝色，但我配出来的考马斯亮蓝溶液却是蓝色的，根本不能用。
我把容量器和试剂瓶等重新洗了一遍，再配制仍然如此。我的配方及配制方法都是正确的。考马斯亮蓝G-250 100mg先溶于50mL95%乙醇中，加100毫升85%磷酸，去离子水稀释到1升
在百度和google里查了下，有的说可能的原因是器皿被蛋白质污染了，但我觉得这种可能性不大。
不知何故，实验因此而停下来了。求救于各位虫子帮忙分析分析，有没有遇到过同样的问题，是什么原因导致的，怎么解决这个问题？？
谢谢了，急啊！！

[ Last edited by robot551 on 2009-4-4 at 08:46 ]
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1楼 2009-04-02 20:32:59
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我是我2082

木虫 (职业作家)
★
robot551(金币+1,VIP+0):我已经百度和GOOGLE了，这个我看到过。不是问题所在，谢谢关注 4-2 21:14
我在Google上找到的，你可以照下面的试试下，看还有没有你所描述的情况

染色液配制: 1 mol/ L 盐酸溶液(A) ,1 g/ L CBB G250 溶液(B) ; 应用时用1 ml A 液和15 ml B 液混合加水至1 L , 搅拌混匀。

注意，关键所在是应用的时候再混合，不要配好等着染色。
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2楼2009-04-02 20:47:50
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
是不是说Bradford方法？一般这个溶液都是买现成的，然后稀释
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会当凌绝顶，一览众山小
3楼2009-04-02 21:18:19
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robot551

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sutao1979 at 2009-4-2 21:18:
是不是说Bradford方法？一般这个溶液都是买现成的，然后稀释

就是Bradford法，能买现成当然最好了，只是现在要自己配制。
以前经常用这种方法，只是这次出问题了。
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4楼2009-04-02 21:28:37
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yumo

新虫 (小有名气)
★ ★
350784478(金币+1):谢谢提供
robot551(金币+1,VIP+0):我的步骤跟你的一样，应该没有问题，你配出来的是红色的么？我的是深蓝色～ 4-3 08:46
前几天刚配了这东西。步骤是这样的，考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50mL95%乙醇中，加入100毫升85%磷酸，用双蒸水稀释到1000毫升，滤纸过滤。没出现什么异常情况。是用的这个吗？若没，试试。
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5楼2009-04-02 22:22:58
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
★
350784478(金币+1):谢谢提供
你们的配方为何和我们实验室的差这么多？楼主试试我的配方，配成后是深蓝色接近黑色。全新燃料染色只要10分钟。

R250考马斯亮蓝0.5g
甲醇450ml
冰醋酸100ml
用水定容到1L
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6楼2009-04-02 22:45:12
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yidiankucao

铁虫 (初入文坛)
我的配方也是
R250考马斯亮蓝0.5g
甲醇450ml
冰醋酸100ml
用水定容到1L
然后用滤纸过滤一下就好。呈特别黑蓝色。而且很多时候我都反复用，都没有问题的。
楼主加油，试试，肯定行。
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7楼2009-04-03 01:09:21
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robot551

金虫 (正式写手)
6楼和7楼两位用的是考马斯亮蓝R－250，我用的是考马斯亮蓝G－250
方法不一样，配方当然不同了
谢谢关注！
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8楼2009-04-03 08:48:40
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112976553

金虫 (小有名气)
配个靠马死亮蓝还有这么多区别，以前还真不知道。学习！
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9楼2009-04-03 09:32:09
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yumo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by robot551 at 2009-4-2 21:28:

就是Bradford法，能买现成当然最好了，只是现在要自己配制。
以前经常用这种方法，只是这次出问题了。

不是红色啊，是不是你的试剂出问题了，换个新的试试。
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10楼2009-04-03 12:04:14
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