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张文将

新虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖电泳 杂带已有3人参与

最近在做小鼠鼠尾基因鉴定,野生小鼠的片段是是428bp,纯合子的片段是346,用的是AB液体裂解法裂解鼠尾,得出来的目的片段的位置正确,但是在接近200BP的位置总是有挥之不去的杂带(左边是目的条带,右边是杂带),刚开始做的时候还没有,随后标本放到-20度冰箱里面又重新做了几次,条带向魔咒一样存在,整个人都快崩溃了,求大神指教,谢谢!

琼脂糖电泳 杂带
QQ图片20180815133923.jpg
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张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by petty04 at 2018-08-16 11:50:46
那个根本不是杂带啊,那是你引物用多了,过量的引物吧。引物量减半,PCR轮数再增加几轮就可以了。

多谢,哈哈,可以加为好友吗?

发自小木虫Android客户端
11楼2018-08-16 16:04:42
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查看全部 11 个回答

小忆时代

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那个应该不是杂带,是引物二聚体吧。目的条带那么亮,应该不影响后续实验的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2018-08-15 15:28:04
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张文将

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小忆时代 at 2018-08-15 15:28:04
那个应该不是杂带,是引物二聚体吧。目的条带那么亮,应该不影响后续实验的

谢谢,刚刚做的时候没有,但是做了几天这个地方就出现了挥之不去的亮带,痛苦!

发自小木虫Android客户端
3楼2018-08-15 15:58:09
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一次做没问题,重复有杂带,可能有污染。目的条带正确能判断基因型就可以了吧。多问一句,第一次做pcr没有问题,应该已经确定基因型了,为啥还要做第二次?

发自小木虫IOS客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2019更好更棒!
4楼2018-08-15 18:28:34
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