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pMD19-T载体连接，怎么都连接不上是怎么回事？求大神 已有6人参与
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我的目的片段36Kb左右，用的酶是TaKaRa的PreMix Taq，连接体系是1μl19-T，1.5μl回收产物，2.5μl水，5μlSolution Ⅰ，16°C，30分钟，转入DH5α感受态，然后用氨苄板筛，然后做菌液pcr。 同一株困用19-T的通用引物P一遍，用我自己目的基因的特异引物P一遍，我挑了50个菌落，什么都没有P出来，不管是T载体的还是我自己目的基因的，都没有P出来，请问大神们是哪里出了问题？ 还有一个问题想请教，我看这个19-T载体的说明书说什么蓝白菌落的，我怎么没有遇到，还有和19-T载体装在一起的那个Control Insert是什么，我的体系里没有正常吗？ @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
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感谢回复，我师姐说抗氨苄的基因在T载体上，如果没有转进去不是应该长不出来吗？我的意思是能长出来的大肠杆菌最起码是，就算没有连上我的基因，但是T载体转进去的大肠杆菌吧，可是我做菌液pcr见T载体也没有显示条带，是怎么回事？是不是我哪里有什么遗漏？ 发自小木虫IOS客户端 |
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