应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于SDS-PAGE电泳图谱分析的疑问
101/1返回列表
查看: 1058  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

annsp

金虫 (正式写手)

[交流] 关于SDS-PAGE电泳图谱分析的疑问

我有一张SDS-PAGE电泳图谱，颜色深的是我的目标表达蛋白。我点样之前定过蛋白，点样的时候保证的是总蛋白一样，所以有些样的点样量只有1.3μl。可最后的结果，貌似是有些样的总蛋白浓度太少了吧。是不是从图上一眼就能看出总蛋白不一致啊？可问题是颜色浅的样正好是我点样量少的样，请问这是怎么回事？定蛋白的时间跟加完loding buffer的间隔有2小时（期间蛋白一直在冰上），蛋白会降解的那么快么？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-03-31 21:30:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
差别是有点过于明显，一看就让人判断上样量不均匀，不知道你的定量是怎么定量的，是浓度测定还是用control直接加等量？一般表达和control都是同一条件培养，然后上样均等再作比较的啊。
赞一下 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-03-31 22:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annsp

金虫 (正式写手)
我是先测了蛋白浓度，然后取点样量和蛋白浓度乘积相等，这样点的样总蛋白应该一样吧
赞一下 回复此楼
3楼2009-04-01 09:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xl-ray

金虫 (小有名气)
从你的图中可以看出几个泳道中的总蛋白量有明显的差别，你定量后上样有没有扣除lording buffer的稀释？因为上样量太少不利于准确定量。
赞一下 回复此楼
4楼2009-04-01 17:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yidiankucao

铁虫 (初入文坛)
Loading buffer稀释不均匀，取得上清中蛋白量最少，特别是上了1.3μl的样，根本不能保证它的量。要定量最好让他们上样的体积稍大些，这样保证最浓的蛋白也能上到5-8μl，这样的偏差能少些。 对于蛋白降解，两个小时按说也没有那么快。但还是定完量跑电泳，就直接做了更放心。
赞一下 回复此楼
5楼2009-04-01 23:11:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yidiankucao

铁虫 (初入文坛)
Loading buffer稀释不均匀，取得上清中蛋白量最少，特别是上了1.3μl的样，根本不能保证它的量。要定量最好让他们上样的体积稍大些，这样保证最浓的蛋白也能上到5-8μl，这样的偏差能少些。 对于蛋白降解，两个小时按说也没有那么快。但还是定完量跑电泳，就直接做了更放心。
赞一下 回复此楼
6楼2009-04-01 23:11:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
对对，体积越小误差越大，所以还是稀释了上大体积比较好，浓度测的时候也要注意体积的影响。
赞一下 回复此楼
金币是赌出来的
7楼2009-04-02 09:05:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恒星年

银虫 (正式写手)
体积太小了，误差会比较大的。
顺便问一下，你用的是什么marker？什么公司的啊？
赞一下 回复此楼
8楼2009-04-02 15:31:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
是用银染还是考染？银染不能用来定量。。。
赞一下 回复此楼
9楼2009-04-02 18:39:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annsp

金虫 (正式写手)
明白了，我再试试，谢谢
赞一下 回复此楼
10楼2009-04-02 21:17:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 annsp 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 308求调剂 +5 墨墨漠 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:19 by 544594351
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 材料277求调剂 +4 min3 2026-03-24 4/200 2026-03-25 15:29 by fch1983
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭