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关于蓝白筛选的问题
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我做TA克隆时，蓝白筛选，对照 （没有AMP)全是白的,蓝白筛选几乎都是白的，只有一两个菌落是蓝色的 还有： 1，我的平板没有用石蜡膜封口，会不会是这个原因？ |
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4楼2009-03-31 10:28:30
2楼2009-03-31 09:25:51
wjswj
木虫 (正式写手)
小木虫领金币专业户
- 应助: 16 (小学生)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
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yghboy168(金币+1,VIP+0):60 4-2 09:07
yghboy168(金币+1,VIP+0):比较中肯 4-11 09:24
yghboy168(金币+1,VIP+0):60 4-2 09:07
yghboy168(金币+1,VIP+0):比较中肯 4-11 09:24
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你的对照是怎么做的？是直接涂的感受态细胞，还是转化完了的菌液？你对照的目的是什么？你用的是否是连接酶里带的对照片段连接转化后的菌液当对照？这些你都应该想明白。 不加amp的平板你涂的同加了amp平板一样的转化产物全长白斑也没什么好奇怪的，一来两块平板涂相同体积的菌液没有抗性的上面长得要比有抗性上的多得多，有质粒没有质粒的都能长，而且没有质粒的也都应该是白斑。所以看不到蓝的也正常。再者你的抗性板上不是也有蓝斑了吗？而且比较少，说明载体的质量不错很少有没切开的。接着往下做筛选就好了。绝对不会是没贴封口膜的原因。 |
3楼2009-03-31 09:58:23
5楼2009-04-02 09:08:54
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