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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于蓝白筛选的问题
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yghboy168

银虫 (小有名气)

[交流] 关于蓝白筛选的问题

我做TA克隆时，蓝白筛选，对照 （没有AMP)全是白的,蓝白筛选几乎都是白的，只有一两个菌落是蓝色的
还有：
1，我的平板没有用石蜡膜封口，会不会是这个原因？
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
1楼 2009-03-31 09:10:20
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
★ ★
yghboy168(金币+1,VIP+0):70 4-2 09:06
yghboy168(金币+1,VIP+0):bycuo 4-11 09:22
如果转化没有做好，很大可能是连接的问题。

之前做蓝白筛选都是用LB带Amp的平板，不过蓝斑一两个少了，不知道你白斑多少。

但我们这边平板好像没有石蜡膜封口，照样结果很不错。那个应该不是主要原因。
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2楼2009-03-31 09:25:51
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
★ ★
yghboy168(金币+1,VIP+0):60 4-2 09:07
yghboy168(金币+1,VIP+0):比较中肯 4-11 09:24
你的对照是怎么做的？是直接涂的感受态细胞，还是转化完了的菌液？你对照的目的是什么？你用的是否是连接酶里带的对照片段连接转化后的菌液当对照？这些你都应该想明白。
不加amp的平板你涂的同加了amp平板一样的转化产物全长白斑也没什么好奇怪的，一来两块平板涂相同体积的菌液没有抗性的上面长得要比有抗性上的多得多，有质粒没有质粒的都能长，而且没有质粒的也都应该是白斑。所以看不到蓝的也正常。再者你的抗性板上不是也有蓝斑了吗？而且比较少，说明载体的质量不错很少有没切开的。接着往下做筛选就好了。绝对不会是没贴封口膜的原因。
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金币是赌出来的
3楼2009-03-31 09:58:23
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朱静华

铜虫 (初入文坛)
★
yghboy168(金币+1,VIP+0):60 4-2 09:07
不会是你说的那个原因，我也没用石蜡封口，但做出来了。你可以参考一下天根的那个T载体克隆试剂盒里的方法设立对照组，当时我做的对照效果很显著。
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4楼2009-03-31 10:28:30
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yghboy168

银虫 (小有名气)
后来又培养了一段时间，奇怪的是：对照一个菌液没长，蓝白筛选平板很正常，蓝白菌落比大概4：6
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眼内有尘三界窄，心头无事一床宽！
5楼2009-04-02 09:08:54
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wangzhebasa

木虫 (著名写手)
??
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...................我是美丽的签名档..................Ifeelsomethinghere.Somethingtrue.
6楼2009-04-02 10:52:32
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your2007

至尊木虫 (著名写手)
这和转化效率有关系，其实只要一批次的实验有蓝斑，少点不要紧，篮白实验不是100%可靠，通过菌液电泳，可以尝试挑选一些做阳性克隆子的初步筛选，
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爱人者被爱，敬人者人敬
7楼2009-04-02 11:09:49
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anik

银虫 (正式写手)
这个只要有阳性克隆就可以吧，管他蓝斑多还是少阿。不过，没有封口对结果没啥影响，只是保证不受污染而已。。。
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8楼2009-04-02 18:44:02
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gandalf886

银虫 (小有名气)
可以不用蓝白筛，挑十个转化子提质粒，肯定有阳性克隆
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9楼2009-04-02 21:18:10
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