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liang918

金虫 (小有名气)

[交流] 请教GST pull-down assay和免疫共沉淀的区别?

在别处看了别人的帖子,但还是有些迷糊,希望有人指导。
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爱老婆,爱工作
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liudaihualyh

金虫 (小有名气)

免疫共沉淀是用抗原抗体原理,而GST pull-down也可形象的叫基因垂钓
5楼2009-12-25 23:17:06
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everbeen

木虫 (小有名气)

GST pull-down一般指用一个带GST tag的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。
co-IP一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。

二者都是用于检测蛋白相互作用的实验。区别是pull-down一般是验证in vitro相互作用;co-IP一般用于检测细胞水平的in vivo相互作用。

特殊的,也有人在重组蛋白水平,利用抗原抗体的反应,来进行pull-down实验。但这种方法文献里用得很少,而且,该属于pull-down还是co-IP,本人没看到明确定义。
个人认为应该属于pull-down。
2楼2009-03-30 18:19:09
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liang918

金虫 (小有名气)

非常感谢能够作答,不过我怎么感觉都是在体外水平检测蛋白相互作用,因为都是通过细胞裂解获得的蛋白,我对两者的区别还是不太明白,能不能重点讲下他们的区别。
爱老婆,爱工作
3楼2009-04-01 16:52:55
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宁静3293

银虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
co-IP虽然也是在细胞裂解得到蛋白,但这时候复合体已经形成了。也就是说蛋白复合体在体内形成。
4楼2009-12-23 16:46:01
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