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2581093517

新虫 (小有名气)

[求助] 抽提植物基因组DNA,做双酶切,结果没切开,求助分析原因

抽提植物基因组DNA,做双酶切,结果没切开。酶切体系为,1ug 植物基因组DNA,两种酶各5个单位,NEB的酶,37度PCR仪上酶切3个小时。跑电泳:配2%的琼脂糖凝胶,100V跑30分钟,胶图如下,我认为单酶切和双酶切都没有切开,大家帮着分析分析原因,都开始怀疑实验室的灭菌双蒸水了,谢谢各位。

抽提植物基因组DNA,做双酶切,结果没切开,求助分析原因
微信图片_20180705201312.jpg
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eulota

金虫 (著名写手)

你这样做极有可能看不到切出来的条带,因为切出来的条带的量对于基因组DNA来说微乎其微

发自小木虫IOS客户端
11楼2018-10-26 20:03:28
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-24 21:36:24
引用回帖:
3楼: Originally posted by 2581093517 at 2018-07-05 20:23:39
感谢回复。是不是和胶浓度有关?...

可能会有影响,可以试试1%的胶120V/30min
4楼2018-07-05 20:31:44
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-24 21:36:44
基因组DNA用0.6-0.8%的琼脂糖凝胶跑电泳即可。

发自小木虫IOS客户端
10楼2018-07-24 21:30:32
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普通回帖

domopal

铁杆木虫 (正式写手)

2楼2018-07-05 20:19:29
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2581093517

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by domopal at 2018-07-05 20:19:29
甲基化影响

感谢回复。是不是和胶浓度有关?
3楼2018-07-05 20:23:39
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2581093517

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-07-05 20:31:44
可能会有影响,可以试试1%的胶120V/30min...

谢谢,其实我试过了,0.8%的胶,但是很模糊,出现了smear,我觉得是切开了,但老板说0.8%的胶能切开,为什么2%的胶就不行?我彻底蒙了。
5楼2018-07-05 20:47:44
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
5楼: Originally posted by 2581093517 at 2018-07-05 20:47:44
谢谢,其实我试过了,0.8%的胶,但是很模糊,出现了smear,我觉得是切开了,但老板说0.8%的胶能切开,为什么2%的胶就不行?我彻底蒙了。...

跑的时间短了吧
6楼2018-07-05 21:19:16
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

2%浓度太大了,大片段根本分不开

发自小木虫IOS客户端
7楼2018-07-05 22:38:22
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

8楼2018-07-05 22:38:52
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2581093517

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cxwu10016869 at 2018-07-05 22:38:52
0.8%的胶就可以了

嗯,我觉得跟胶浓度也有关系
9楼2018-07-24 21:19:17
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