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丿涛涛不倔

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大佬,关于粗抗菌肽透析后抑菌性消失的问题急求解决已有1人参与

我现在通过酶解得到一种抗菌肽粗酶解液,抑菌试验显示有很好的抑菌性,想通过透析除盐后过柱子进一步分离纯化,问题就出在这,我用截留分子量7000D,甚至3000D的透析袋透析过后冻干,然后重新溶解后测试抑菌性能,就没!抑!菌!性!了!试了两次都这样,急求怎么解决啊,难道是我的目的抗菌肽分子量很小吗?但是看了别的文献一般抗菌肽小于3000D的很少啊,类似的都应该不至于那么小,操作有问题吗?还是我需要买截留分子量更小的透析袋试啊?急求各位大佬帮忙解决啊!
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丿涛涛不倔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 大星星呀哈 at 2018-08-01 09:53:46
对,跟pH是有关系的,酶用的是哪种
...

用的胃蛋白酶,pH怎么影响的呢?
10楼2018-08-03 14:46:54
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
既然大分子没活性,只能去尝试小分子了,
另外,十几个氨基酸的抗菌肽也有啊,分子量具体是多少,还是要看你自己的样品,

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2018-07-05 16:04:17
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丿涛涛不倔

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2018-07-05 16:04:17
既然大分子没活性,只能去尝试小分子了,
另外,十几个氨基酸的抗菌肽也有啊,分子量具体是多少,还是要看你自己的样品,

你好,谢谢您的解答。这个透析后蛋白样品的抑菌性跟透析液和ph有没有关系啊,我用的ph7.0的PBS缓冲液透析的,透析后就没有抑菌性了,但是好像之前试过只用蒸馏水透析后还是存在抑菌性的。
3楼2018-07-09 11:05:26
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A8610587

新虫 (小有名气)

跑了sds-page胶吗?粗产品的纯度怎么样?

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4楼2018-07-24 20:27:41
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丿涛涛不倔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by A8610587 at 2018-07-24 20:27:41
跑了sds-page胶吗?粗产品的纯度怎么样?

粗产品跑出来是很长一团,无法分辨分子量,所以要纯化
5楼2018-07-27 21:14:17
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A8610587

新虫 (小有名气)

好像透析袋能透过标注的三倍分子量的(这个我不确定),你可以把没活性的样品跑下胶看看条带,如果条带损失严重,就要重新研究纯化的方法,如果条带不怎么变,有可能是粗酶液里面其他东西有抑菌效果。虽然胶图弥散,还是能大概看出分子量的吧。

发自小木虫Android客户端
6楼2018-07-29 00:32:26
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A8610587

新虫 (小有名气)

抗菌肽分子量太小,最好跑tricine胶

发自小木虫Android客户端
7楼2018-07-29 00:33:41
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大星星呀哈

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

8楼2018-08-01 09:53:46
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丿涛涛不倔

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by A8610587 at 2018-07-29 00:32:26
好像透析袋能透过标注的三倍分子量的(这个我不确定),你可以把没活性的样品跑下胶看看条带,如果条带损失严重,就要重新研究纯化的方法,如果条带不怎么变,有可能是粗酶液里面其他东西有抑菌效果。虽然胶图弥散, ...

嗯嗯,我现在用的过葡聚糖凝胶G15柱来脱的盐,过完柱后做了抑菌性测试,还是有很好的抑菌性的,说明起抑菌作用的应该还是粗酶液中的蛋白质吧
9楼2018-08-03 14:46:01
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