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【求助】电镜观察细胞，处理方法？
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我在二氧化钛上繁殖了成骨细胞，已经固定好了，PBS也洗了几次，现在想观察细胞的生长与繁殖情况。能不能，用去离子水漂洗几次后，自然风干（大约8小时）后喷金进行电镜观察。 我看后多文章说要用梯度脱水后能观察，脱水的目的是什么？而且还要梯度脱水？然后临界干燥的目的又是什么？因为怕脱水后，细胞不饱满了，所照的图片不漂亮。请各位大虾多多指点。 [ Last edited by yusen_1982 on 2009-3-28 at 21:02 ] |
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电镜观察细胞处理各步骤详细分析与说明
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yusen_1982(金币+1,VIP+0):欢迎应助 3-30 10:37
ambitionxx(金币+2,VIP+0):很明白，谢谢！ 3-31 12:26
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SEM（细胞粘附）实验方法： 1．细胞2*104/ml接种到材料上； 2．4,7,（3,5）天取样； 3．吸弃原有培养基； 4．加入1mLPBS培养基吹洗材料* 3次； ------------这步的目的是洗去细胞及材料表面杂质 5．吸弃PBS加入2.5-3.0% 戊二醛（固定2.5－3h）； -------这步的目的是将细胞内的细胞骨架，细胞器，蛋白质固定 6．吸弃戊二醛,30%,50%,75%,80%,95%,100%(两次)梯度乙醇脱水（15min/次）； ---------梯度脱水是在损伤最小的情况下将细胞内的水去掉，用酒精代替，使细胞内原本是水的地方充填酒精，保持细胞原有形貌 7．在玻璃瓶中乙酸异戊酯替换（大于30min）； -----------用乙酸异戊酯替换细胞内的酒精，是细胞内完全充填乙酸异戊酯，保持细胞原有形貌 8．临界点干燥后送扫描电镜观察。 --------出去可能存在的水分，以便上电镜，此时的细胞完全由乙酸异戊酯充填，保持原有形貌 SEM试验注意事项： 1.戊二醛现配现用； 2.用乙酸异戊酯替换时必须使用玻璃瓶； 自然风干是绝对不允许的，风干细胞内的细胞器等会坍塌， |
6楼2009-03-30 09:16:18
我是我2082
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2楼2009-03-29 13:11:26
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