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rainontime

新虫 (小有名气)

[求助] 稳转丢失

lipo转入EGFP质粒后,加药G418筛选10天了。细胞开始死了很多很多,后来慢慢涨起来了。之前看绿色荧光很亮,后来越来越暗。今天把6孔板的转到瓶里养,已经完全看不见绿色荧光了,但是细胞却长得很欢脱。请问是什么原因呢?是neo没丢失而EGFP丢失了???我应该要怎么做呢?谢谢。
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

应该说是丢失质粒的耐药细胞疯长起来了吧。只能重头再来了!

发自小木虫Android客户端
2楼2018-06-29 11:17:37
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-06-29 11:17:37
应该说是丢失质粒的耐药细胞疯长起来了吧。只能重头再来了!

请问重来的话可以怎么改进呢?是多做几批提高概率吗?谢谢!
3楼2018-06-29 12:03:04
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

可以这么做,筛选可以多做几个孔,否则一个周期时间哗啦啦的过去了。

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4楼2018-06-29 12:03:59
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-06-29 12:03:59
可以这么做,筛选可以多做几个孔,否则一个周期时间哗啦啦的过去了。

谢谢!请问还有别的需要注意和改进的地方吗?
5楼2018-06-29 12:12:32
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

我们有人做过尝试,就是对转染细胞筛选一段时间后进行二次转染以提高筛选效率。作稳转首先要确保转染率。在条件允许情况下尝试慢病毒感染,可能会效率高一些。

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6楼2018-06-29 18:05:16
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rainontime

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-06-29 18:05:16
我们有人做过尝试,就是对转染细胞筛选一段时间后进行二次转染以提高筛选效率。作稳转首先要确保转染率。在条件允许情况下尝试慢病毒感染,可能会效率高一些。

太感谢了!我想给您评分送金币,但是显示“当前回帖不是应助回帖,您不能对此进行金币奖励哦”。您回个应助帖,我好给您金币。
7楼2018-07-02 09:11:27
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

举手之劳,个人意见,你要是觉得受用就行了。

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8楼2018-07-02 09:20:04
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