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CPC1985

新虫 (初入文坛)

[交流] BL21表达融合蛋白后,成了温度敏感,出现细胞破碎,求助可能原因

最近在用BL21表达自己的融合蛋白GST-fusion protein,但很奇怪,有几个单克隆转到26度诱导后,开始的一个小时左右OD值有所增加,再过一个小时就看见培养基已经变得比较清了,很明显的发现细菌数减少。开始怀疑是IPTG的毒害作用,也曾用不同的IPTG浓度,发现就是不加IPTG的对照管里也出现了细菌裂解的现象。然而37度的对照组长的很好,OD值增加。

如果里面的细菌还有,继续放回37度复壮过夜,第二天就会发现培养基又混浊了。    奇怪的是如果再把他转到26度,他就不再出现以上细菌裂解的现象了。

真的一头的雾水,很希望能听听各位大侠的猜测和建议。我现在都提不出可靠的假设,但这东西真的蛮有意思的。

本来以为是自己的操作出问题,后来发现他的重复性还蛮高的。所以挺感兴趣。
小弟很希望听听大家的高见~~~~:
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我爱我的专业
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shadowfly

木虫 (小有名气)

关键是,再转到26度后,还能诱导表达蛋白不?
2楼2009-03-28 21:13:53
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liuzhenhai

铁杆木虫 (正式写手)

表达的蛋白对宿主有毒性!!!

表达的蛋白对宿主有毒性!!!更换宿主及载体!!
3楼2009-03-28 22:07:51
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mofatuzi

新虫 (小有名气)

或者是噬菌体污染,如果在一个温度下,菌液忽清忽浊,就说明可能有噬菌体污染
4楼2009-03-29 22:12:23
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

关键是,再转到26度后,还能诱导表达蛋白不?
  对啊,这是需要知道的,噬菌体污染确实能让 菌液变清,但是好像不能又变浑浊,难道噬菌体在37度活不了?
金币是赌出来的
5楼2009-03-30 10:08:30
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CPC1985

新虫 (初入文坛)

26度我检测了,能表达诱导蛋白,但细菌已经破裂了,在仅有的尸体和培养基里都看见了目的蛋白,但此时量很少了。
我爱我的专业
6楼2009-03-30 17:01:02
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CPC1985

新虫 (初入文坛)

还有26度表达蛋白与否说明的是什么问题呢?
表达说明?
不表达又能说明什么呢?
我爱我的专业
7楼2009-03-30 17:03:10
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