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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于自杀性质粒丢失过程中目的条带返回长条带的问题
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huan121004

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于自杀性质粒丢失过程中目的条带返回长条带的问题

本人做缺失，在同源重组传代过程中确定目的基因缺失，但是在PKSV7自杀性质粒在30℃丢失质粒，在此过程中，本来已经丢失的目的基因，经PCR检测又回来了，是什么情况？
求大神们赐教。
面临毕业，在这个过程中卡了太久。
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1楼 2018-06-25 11:56:03
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fsy3224502

金虫 (小有名气)
★
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怎么确定丢失的？PCR之后是否测序？？
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2楼2018-06-25 23:59:14
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huan121004

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fsy3224502 at 2018-06-25 23:59:14
怎么确定丢失的？PCR之后是否测序？？

就是在丢质粒过程中 PCR检测了，发现缺失的目的基因又出现了，很惆怅，不知道什么原因
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我要努力 成为 女王
3楼2018-06-26 17:34:14
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fsy3224502

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by huan121004 at 2018-06-26 17:34:14
就是在丢质粒过程中 PCR检测了，发现缺失的目的基因又出现了，很惆怅，不知道什么原因...

我的意思是你初次鉴定敲除成功就应该测序，先看看是不是真的敲掉，有可能是非特异条带

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4楼2018-06-27 00:39:32
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huan121004

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fsy3224502 at 2018-06-27 00:39:32
我的意思是你初次鉴定敲除成功就应该测序，先看看是不是真的敲掉，有可能是非特异条带
...

初次鉴定是确定丢失了，用内部引物检测，缺失，但是这个过程中获得缺失株必须要丢的质粒，所以就是说没办法在无抗条件下稳定存在？
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我要努力 成为 女王
5楼2018-07-04 10:35:33
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糖霜果子

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问，你在同源重组传代过程中条件是啥呀，我现在一直在传代但找不到我的缺失菌株。

发自小木虫手机客户端
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6楼2024-12-19 13:37:16
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