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草哥cium

新虫 (正式写手)

[求助] 菌摇久了会影响表达吗。 已有1人参与

bl21.单菌落.准备摇起来做甘油菌,以后拿出来一点扩大培养做表达的。。。今天早上开始摇10:30。。晚上忘记取出来了,估计得明天8:30才能取出来,这样子摇久了会不会影响,会不会死完,,或者影响以后1:100扩大培养表达

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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

最好是菌处于对数增长期,刚刚达到平稳期保菌比较好,我们的操作基本上单菌落摇不超过12小时,另外BL21里面如果载体是Amp抗性,摇久了很容易质粒丢失,因为摇久了菌分泌的酶完全可以降解青霉素使得抗生素根本没有选择压力。所以质粒丢失的菌体仍然会疯长。不要嫌麻烦,将菌按1:1000重新接菌摇一下比较保险。

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4楼2018-06-25 18:31:17
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查看全部 5 个回答

司马错

铜虫 (正式写手)

会影响菌种活力,不如你早晨转接一下,重新培养晚上部分保种,部分再转,次日扩大培养,如果有能加抗生素那是一定要加的。

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优秀成为习惯
2楼2018-06-25 00:49:42
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
肯定会影响,你明天8:30拿出来,在转接下,培养4,5个小时就可以了。祝顺利。
3楼2018-06-25 13:30:49
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草哥cium

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-06-25 18:31:17
最好是菌处于对数增长期,刚刚达到平稳期保菌比较好,我们的操作基本上单菌落摇不超过12小时,另外BL21里面如果载体是Amp抗性,摇久了很容易质粒丢失,因为摇久了菌分泌的酶完全可以降解青霉素使得抗生素根本没有选 ...

我的是kan+的。。是不是质粒一般丢失概率不大。。

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5楼2018-06-25 23:53:08
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