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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 菌定量和定性检测，为什么加水也能扩出来
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)
大家给我出出注意别只领金币呀

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171楼2018-06-22 20:34:21
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xgz@

新虫 (正式写手)
是不是被污染了

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172楼2018-06-22 23:08:26
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北京金百特

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
173楼2018-06-24 18:14:48
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
污染呗

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174楼2018-06-25 07:05:37
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cventbio

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我最近在做菌的定植和母体传播，实验是这样的给小鼠灌喂一种特异菌，然后一定时间后检测该菌在肠道的定植情况和在胎盘中的定植情况。在采用荧光定量和普通PCR检测，结果发现普通定量中，空白阴性对照（加dd水，就是PCR时不加入DNA,加去离子灭菌水）也发现有条带，荧光定量是也检测出了循环值，而且低于灌喂该种菌的小鼠中的循环值。希望大神能给点意见，为什么pcr中不加入DNA也扩增出来了该条带，引物的特异性，退火温度都检测过了，没问题，特异性都很好。望大神解答，谢谢了！


您好 你检测的基因只有一个？pcr的跑胶情况？很多情况你要阐述？
pcr 问题通常采用排查的办法，因此验证的环节多一些。
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175楼2018-06-28 10:04:29
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)
PCR跑胶的条带，水的扩增出来的条带大小不对，我怀疑是不是水被污染了。下一步准备验证排除水的可能

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176楼2018-06-28 22:43:13
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罗飞同学1993

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主解决了吗？我也遇到了同样的问题。
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177楼2018-11-07 11:15:29
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)
★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 鼓励交流 2018-11-10 15:39:32
水要换成分子级的无菌水，水中可能存在这种菌，至于动物中可能是由于引物特异性的问题。水中扩增是由于水被污染了的问题，还有就是尽量在超净台去做，因为空气也有某些菌，避免污染。

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178楼2018-11-07 14:51:05
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罗飞同学1993

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
178楼: Originally posted by 西大慢慢 at 2018-11-07 14:51:05
水要换成分子级的无菌水，水中可能存在这种菌，至于动物中可能是由于引物特异性的问题。水中扩增是由于水被污染了的问题，还有就是尽量在超净台去做，因为空气也有某些菌，避免污染。
...

我现在是做病毒检测，巢式PCR第一轮产物，水不会出现条带；但是在第二轮就会有，而且和我目的条带大小基本一致，换了水，重新合成了引物，还是有条带。很纠结...
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179楼2018-11-07 21:12:04
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)
你在超净台里试试，点上酒精灯。然后每一步都尽量避免污染，水去买那种试剂公司的，你给他说你要分子级别的，以前我自己灭菌的miniq的水也有条带

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180楼2018-11-08 15:19:31
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罗飞同学1993

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
180楼: Originally posted by 西大慢慢 at 2018-11-08 15:19:31
你在超净台里试试，点上酒精灯。然后每一步都尽量避免污染，水去买那种试剂公司的，你给他说你要分子级别的，以前我自己灭菌的miniq的水也有条带

感谢楼主！
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181楼2018-11-09 16:14:21
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
初步怀疑体系污染，dd水绝逼应该是阴性

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182楼2018-11-10 15:40:01
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微笑0692

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你好，我也同样出现了pcr中不加模板的空白对照也跑出了条带，请问你后来是怎么解决这个问题的？

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183楼2019-08-25 22:39:53
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ngzxqv819151楼
2018-06-22 13:56   回复  
西大慢慢(金币+3): 谢谢参与
kvpgsuy584152楼
2018-06-22 14:03   回复  
西大慢慢(金币+3): 谢谢参与
spc08153楼
2018-06-22 14:06   回复  
西大慢慢(金币+3): 谢谢参与
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spc08154楼
2018-06-22 14:07   回复  
西大慢慢(金币+3): 谢谢参与
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fbcrku16155楼
2018-06-22 14:09   回复  
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skryynu74156楼
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bunde77157楼
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ttkedn195158楼
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gpajhht80159楼
2018-06-22 14:19   回复  
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jwjuxmz434160楼
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cwdfm36161楼
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MicroShop170楼
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