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西大慢慢

铁虫 (著名写手)


大家给我出出注意别只领金币呀

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171楼2018-06-22 20:34:21
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xgz@

新虫 (正式写手)


172楼2018-06-22 23:08:26
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北京金百特

禁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

173楼2018-06-24 18:14:48
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174楼2018-06-25 07:05:37
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cventbio

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近在做菌的定植和母体传播,实验是这样的给小鼠灌喂一种特异菌,然后一定时间后检测该菌在肠道的定植情况和在胎盘中的定植情况。在采用荧光定量和普通PCR检测,结果发现普通定量中,空白阴性对照(加dd水,就是PCR时不加入DNA,加去离子灭菌水)也发现有条带,荧光定量是也检测出了循环值,而且低于灌喂该种菌的小鼠中的循环值。希望大神能给点意见,为什么pcr中不加入DNA也扩增出来了该条带,引物的特异性,退火温度都检测过了,没问题,特异性都很好。望大神解答,谢谢了!


您好 你检测的基因只有一个?pcr的跑胶情况?很多情况你要阐述?
pcr 问题通常采用排查的办法,因此验证的环节多一些。
175楼2018-06-28 10:04:29
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)


PCR跑胶的条带,水的扩增出来的条带大小不对,我怀疑是不是水被污染了。下一步准备验证排除水的可能

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176楼2018-06-28 22:43:13
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罗飞同学1993

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主解决了吗?我也遇到了同样的问题。
177楼2018-11-07 11:15:29
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)


★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 鼓励交流 2018-11-10 15:39:32
水要换成分子级的无菌水,水中可能存在这种菌,至于动物中可能是由于引物特异性的问题。水中扩增是由于水被污染了的问题,还有就是尽量在超净台去做,因为空气也有某些菌,避免污染。

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178楼2018-11-07 14:51:05
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罗飞同学1993

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
178楼: Originally posted by 西大慢慢 at 2018-11-07 14:51:05
水要换成分子级的无菌水,水中可能存在这种菌,至于动物中可能是由于引物特异性的问题。水中扩增是由于水被污染了的问题,还有就是尽量在超净台去做,因为空气也有某些菌,避免污染。
...

我现在是做病毒检测,巢式PCR第一轮产物,水不会出现条带;但是在第二轮就会有,而且和我目的条带大小基本一致,换了水,重新合成了引物,还是有条带。很纠结...
179楼2018-11-07 21:12:04
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西大慢慢

铁虫 (著名写手)


你在超净台里试试,点上酒精灯。然后每一步都尽量避免污染,水去买那种试剂公司的,你给他说你要分子级别的,以前我自己灭菌的miniq的水也有条带

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180楼2018-11-08 15:19:31
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罗飞同学1993

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
180楼: Originally posted by 西大慢慢 at 2018-11-08 15:19:31
你在超净台里试试,点上酒精灯。然后每一步都尽量避免污染,水去买那种试剂公司的,你给他说你要分子级别的,以前我自己灭菌的miniq的水也有条带

感谢楼主!
181楼2018-11-09 16:14:21
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初步怀疑体系污染,dd水绝逼应该是阴性

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182楼2018-11-10 15:40:01
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微笑0692

新虫 (初入文坛)



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你好,我也同样出现了pcr中不加模板的空白对照也跑出了条带,请问你后来是怎么解决这个问题的?

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183楼2019-08-25 22:39:53
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ngzxqv819151楼
2018-06-22 13:56   回复  
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kvpgsuy584152楼
2018-06-22 14:03   回复  
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spc08153楼
2018-06-22 14:06   回复  
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spc08154楼
2018-06-22 14:07   回复  
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祝福 发自小木虫IOS客户端
fbcrku16155楼
2018-06-22 14:09   回复  
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skryynu74156楼
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bunde77157楼
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ttkedn195158楼
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gpajhht80159楼
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jwjuxmz434160楼
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cwdfm36161楼
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wwxurf71163楼
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hepvb659167楼
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MicroShop170楼
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