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西大慢慢

铁虫 (著名写手)

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[交流] 菌定量和定性检测，为什么加水也能扩出来

我最近在做菌的定植和母体传播，实验是这样的给小鼠灌喂一种特异菌，然后一定时间后检测该菌在肠道的定植情况和在胎盘中的定植情况。在采用荧光定量和普通PCR检测，结果发现普通定量中，空白阴性对照（加dd水，就是PCR时不加入DNA,加去离子灭菌水）也发现有条带，荧光定量是也检测出了循环值，而且低于灌喂该种菌的小鼠中的循环值。希望大神能给点意见，为什么pcr中不加入DNA也扩增出来了该条带，引物的特异性，退火温度都检测过了，没问题，特异性都很好。望大神解答，谢谢了！

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1楼 2018-06-22 07:53:04

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罗飞同学1993

铁虫 (小有名气)

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虫号: 4381006

★
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引用回帖:

178楼: Originally posted by 西大慢慢 at 2018-11-07 14:51:05
水要换成分子级的无菌水，水中可能存在这种菌，至于动物中可能是由于引物特异性的问题。水中扩增是由于水被污染了的问题，还有就是尽量在超净台去做，因为空气也有某些菌，避免污染。
...

我现在是做病毒检测，巢式PCR第一轮产物，水不会出现条带；但是在第二轮就会有，而且和我目的条带大小基本一致，换了水，重新合成了引物，还是有条带。很纠结...

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