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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 氨卞抗性转化农杆菌EHA105
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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)

[求助] 氨卞抗性转化农杆菌EHA105

我用来做亚细胞定位的载体抗性是氨卞，转化农杆菌EHA105使用利福平抗性，配的YEB的板子是氨卞加利福平的，但是不到十二小时就长成糊状的菌，做了好几遍了，PCR结果都不对，以前做的卡那抗性的载体转农杆菌都没有问题啊，求助大神，都做了好久了，一直找不到头绪，万分感谢！

@biostar2009 @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2018-06-20 17:08:56
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
农杆菌有氨苄抗性了呗

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2楼2018-06-20 19:03:06
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du20131580

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-06-21 13:37:35
会不会是涂板的菌浓度有点大呢，或者培养基温度有点高抗生素失活，还有抗生素浓度啊之类的都有可能，建议试着双抗板子涂一下未转载体的菌，看看长不长呢

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3楼2018-06-20 19:43:09
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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-06-20 19:03:06
农杆菌有氨苄抗性了呗

不会啊，EHA105不抗氨卞

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4楼2018-06-20 20:19:06
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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)
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5楼2018-06-20 20:20:00
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海阔天空_812

新虫 (小有名气)
加大点抗生素浓度 另外涂板浓度太高也许

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6楼2018-06-20 23:20:50
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海阔天空_812

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 孤单芭蕾527 at 2018-06-20 20:20:00
浓度做了很多梯度都不行，培养温度28度
...

农杆菌摸啥条件啊 28度就行 你要单菌落吗？

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7楼2018-06-20 23:22:20
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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 海阔天空_812 at 2018-06-20 23:20:50
加大点抗生素浓度 另外涂板浓度太高也许

抗生素加到了4倍的量，菌的浓度做了很多梯度哦做出来都是糊状的一片

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8楼2018-06-20 23:23:36
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孤单芭蕾527

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 海阔天空_812 at 2018-06-20 23:22:20
农杆菌摸啥条件啊 28度就行 你要单菌落吗？
...

要挑单菌落做菌检

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9楼2018-06-20 23:24:03
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海阔天空_812

新虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-06-21 13:38:10
引用回帖:
9楼: Originally posted by 孤单芭蕾527 at 2018-06-20 23:24:03
要挑单菌落做菌检
...

看一下抗生素是否失效了 重新买新试剂配 然后划线的时候枪头轻蘸菌液 轻轻划一下 然后换新枪头划 划两下接着换新枪头划 多换几次新枪头 然后出来就是单菌落

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10楼2018-06-21 00:07:33
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