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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 判断大肠杆菌重组蛋白是否可溶 上清和沉淀颜色很浅
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ccmiaoao

新虫 (初入文坛)

[求助] 判断大肠杆菌重组蛋白是否可溶 上清和沉淀颜色很浅 已有2人参与

今年研一提前进了实验室，还跨了专业，瑟瑟发抖，实验结果不好，想知道是哪个环节出了问题，求师兄师姐指点！
诱前全菌和诱后全菌都跑的挺好的，对比也能看出IPTG诱后我的目标蛋白明显表达了。上清沉淀特别浅，诱后好像在目标蛋白那里有一条带，我怀疑是浓度不够或者超声破细胞的时候破碎的不到位。
不知道是目标蛋白不可溶还是细胞没破开，如果没破开的话，跑出来的胶是上清什么都没有，然后沉淀有目标蛋白的带吗？

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1楼 2018-06-07 00:22:15
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
没破开当然就在沉淀了

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2楼2018-06-07 07:40:29
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ccmiaoao

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-06-07 07:40:29
没破开当然就在沉淀了

没破开的话沉淀的条带应该也很明显，我的上清和沉淀的条带都很浅…我按着师姐的论文做的 就是100ml的菌体，用15ml的buffer溶的 就很想不通

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3楼2018-06-07 08:45:27
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
问题太笼统了。
根据你的描述有两种情况，第一，表达量太低，这个要优化诱导条件。
第二，没有彻底破碎，你描述的破碎后上清沉淀都有，就在破碎试试看。

综合根据你的描述表达量太低的可能性比较大，要好好优化表达工艺。
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4楼2018-06-07 13:47:42
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上清液和渣滓沉淀分别电泳染色：
1、比较二者的总蛋白，分析是否裂解充分；
2、比较二者的特异性条带，分析是否可溶性。
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5楼2018-06-08 11:44:21
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