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加A 连T 载体问题
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三鱼舟
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加A 连T 载体问题
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我的pcr 片段加A 连T 载体后菌落pcr 验证没有问题,然后挑验证对的摇菌抽质粒,但浓度超级低,本来以为是感受太态的问题,重新做了一遍,其他片段这么做没有问题,抽出来的质粒浓度很高,但就是这个片段做了一遍质粒浓度还是很低,为什么?求指点
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1楼
2018-06-02 14:16:00
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2018-06-02 15:16:33
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用户晓晓
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专业: 细胞增殖、生长与分化
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渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流
2018-06-29 11:14:30
这个貌似应该跟你链接的片段没有太大的关系。应该还是试验操作的问题。是否可以同时做两个组呢,一个链接你的这个片段,另外做一个阳性对照,要是同时操作还是这中结果的话,那就不知道了,难道你链接的片段转录产物能够影响感受态细胞的扩增???
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3楼
2018-06-02 16:48:55
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Ivy尘
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专业: 作物种质资源与遗传育种学
直接去测序看看,如果是正确的,让返回质粒,不然就重新挑菌
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4楼
2018-06-02 23:47:44
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jurkat.1640
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专业: 病毒学
你用什么引物做PCR验证?
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5楼
2018-06-07 15:18:03
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渊博震天
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专业: 抗体工程学
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【答案】应助回帖
你的质粒浓度是怎么知道的?用仪器测的吗?有没有跑个胶,通过跑胶结果来看看浓度呢?
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6楼
2018-06-10 08:46:48
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Elainefy
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【答案】应助回帖
培养液里有加抗生素吗?或者是不是你插入的片段太大?
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7楼
2018-06-29 10:46:38
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三鱼舟
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Originally posted by
pf790352975
at 2018-06-02 15:16:33
估计是假阳性吧 菌p 有时候不是很准确 重新连接转化
做了两次都是这样的结果,pcr没有问题,但就是抽质粒很低
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8楼
2018-06-29 16:46:49
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三鱼舟
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7楼
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Elainefy
at 2018-06-29 10:46:38
培养液里有加抗生素吗?或者是不是你插入的片段太大?
加了,片段只有1000多bo
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9楼
2018-06-29 16:47:07
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三鱼舟
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9楼
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三鱼舟
at 2018-06-29 16:47:07
加了,片段只有1000多bo
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bp
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10楼
2018-06-29 16:47:14
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