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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 加A 连T 载体问题
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)

[求助] 加A 连T 载体问题 已有4人参与

我的pcr 片段加A 连T 载体后菌落pcr 验证没有问题，然后挑验证对的摇菌抽质粒，但浓度超级低，本来以为是感受太态的问题，重新做了一遍，其他片段这么做没有问题，抽出来的质粒浓度很高，但就是这个片段做了一遍质粒浓度还是很低，为什么？求指点

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1楼 2018-06-02 14:16:00
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匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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2楼2018-06-02 15:16:33
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用户晓晓

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
渊博震天: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-06-29 11:14:30
这个貌似应该跟你链接的片段没有太大的关系。应该还是试验操作的问题。是否可以同时做两个组呢，一个链接你的这个片段，另外做一个阳性对照，要是同时操作还是这中结果的话，那就不知道了，难道你链接的片段转录产物能够影响感受态细胞的扩增？？？
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3楼2018-06-02 16:48:55
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
直接去测序看看，如果是正确的，让返回质粒，不然就重新挑菌

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4楼2018-06-02 23:47:44
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
你用什么引物做PCR验证？
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5楼2018-06-07 15:18:03
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

你的质粒浓度是怎么知道的？用仪器测的吗？有没有跑个胶，通过跑胶结果来看看浓度呢？

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6楼2018-06-10 08:46:48
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Elainefy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

培养液里有加抗生素吗？或者是不是你插入的片段太大？
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7楼2018-06-29 10:46:38
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pf790352975 at 2018-06-02 15:16:33
估计是假阳性吧   菌p 有时候不是很准确  重新连接转化

做了两次都是这样的结果，pcr没有问题，但就是抽质粒很低

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8楼2018-06-29 16:46:49
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Elainefy at 2018-06-29 10:46:38
培养液里有加抗生素吗？或者是不是你插入的片段太大？

加了，片段只有1000多bo

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9楼2018-06-29 16:47:07
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三鱼舟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 三鱼舟 at 2018-06-29 16:47:07
加了，片段只有1000多bo
...

bp

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10楼2018-06-29 16:47:14
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