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会思考的大鹅

新虫 (初入文坛)

[求助] 已知酶底物,怎么获得这种酶的基因或蛋白序列?

我想要研究一个鸡的酶暂称为A,它在人和鼠和其他物种存在,并且能够查到他们的基因和蛋白的序列,而通过酶底物活性测定确定了鸡体内有能够催化和人的酶A相同底物的这种酶,之前研究也是通过不同物种这个酶基因的保守区设计引物P出一小段基因,但是比对结果与鸡同家族的另一酶B同源性高达90以上,所以很困惑现在P到的这一小段如果就是酶B,那么酶B的底物我不确定是不是和酶A相同啊,也有文献说酶B底物是其他的,
那么我现在有必要用RACE继续扩增他的全长看是不是就是酶B呢?
或者
我可以用人的酶A的抗体调取鸡的同源蛋白做免疫沉淀在测序,和酶B做对比吗?(因为能够代谢该底物的酶在鸡体内没有文献报道它的基因或蛋白序列,我不能买到抗鸡酶A的抗体来研究它。)
还是说想要研究酶A与其它转录因子的调控作用,可以不用抗体,不知道基因序列也可以研究,(因为目前就只知道存在代谢这个底物的酶和一段与别的酶同源很高的基因序列)所以我很困惑,希望有没有大神来解答一下我的疑问,或者有没有好的思路,相似的研究分享一下。谢谢啦@gyesang
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Crazy cat

铜虫 (小有名气)


建议提取蛋白做ip之后再分析,毕竟你就算全长序列相同,也不一定表达活性完全相同的蛋白

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2楼2018-06-04 12:56:05
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会思考的大鹅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Crazy cat at 2018-06-04 12:56:05
建议提取蛋白做ip之后再分析,毕竟你就算全长序列相同,也不一定表达活性完全相同的蛋白

是用人的抗体做IP吗

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-06-05 09:35:56
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