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mouquo

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR

请问用质粒或者PCR产物做模板，为什么p出的带会很浅，退火温度还是和原来一样

@gyesang 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2018-05-30 23:24:29
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bo娜娜

新虫 (初入文坛)
很多原因。特异性酶的酶活性不好。做pcr时，管子内不能有气泡，气泡也会导致这个现象。还有可能是胶的原因，如果marker同样很浅，说明胶有问题。还有一种是操作上的误差。

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2楼2018-05-30 23:32:55
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mouquo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bo娜娜 at 2018-05-30 23:32:55
很多原因。特异性酶的酶活性不好。做pcr时，管子内不能有气泡，气泡也会导致这个现象。还有可能是胶的原因，如果marker同样很浅，说明胶有问题。还有一种是操作上的误差。
...

但用的KOD Fx，扩增效率应该很好，同样的基因，也就引物不同，改了酶切位点，操作我觉得不会差那么远吧

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3楼2018-05-31 00:01:22
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bo娜娜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mouquo at 2018-05-31 00:01:22
但用的KOD Fx，扩增效率应该很好，同样的基因，也就引物不同，改了酶切位点，操作我觉得不会差那么远吧
...

回想一下p之前有没有赶掉管子里面的气泡，因为pcr仪是根据光学性质来检测的。如果有气泡，影响还是挺大的

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4楼2018-05-31 00:02:54
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