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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 【求助】透析袋使用
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wyg109

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】透析袋使用

突然要使用透析袋，之前没用过，不知道怎么样的，是不是用之前要处理阿，还要带手套，有懂的吗？麻烦给我说说原理和使用方法。我需要准备什么？

[ Last edited by zhangwj on 2009-3-25 at 00:11 ]
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1楼2009-03-24 23:53:55
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zouqin8091

铜虫 (初入文坛)

透析袋

★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):谢谢,欢迎常来生物材料版 4-2 17:17
透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术，常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质，有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边，缓冲液在另一边，小分子即向两边扩散直到平衡透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术，常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质，有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边，缓冲液在另一边，小分子即向两边扩散直到平衡,而大分子则由于半透膜的阻拦而留在一端，通过不断更换缓冲液，即可将样品中要除掉的小分子稀释到足够低的浓度。该技术自五十年代发展流行起来，主要使用半透膜制成的透析袋作为工具，一直存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品的难题。
透析袋的处理
分子在半透膜间的分离是由膜两侧溶液的浓度差驱动的，受相对于膜内微孔尺寸的分子大小(分子质量)的限制。微孔尺寸决定着截留分子质量，截留分子质量的定义是当90%的溶质分子可被膜截留时的分子质量。实际某一溶质的通透性不仅取决于分子的大小，还取决于分子的形状、分子的水化程度及其所带的电荷。这些参数均受溶剂的性质、pH以及离子强度的影响。因此截留分子质量只能作为参考，而不能绝对地用来预测在各种溶质和溶剂下的透析行为。市售的透析膜孔径范围很大(从100Da到2 000kDa)。在透析大多数质粒DNA和许多蛋白质时，截留分子质量在12000～14000Da之间比较适合。
(1)将透析管剪成适当长度(10～20cm)的小段，即形成透析袋。
(2)在大体积的2%(m/v)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10 min。
(3)将透析袋用蒸馏水彻底漂洗。
(4)将透析袋置1 mmol/L EDTA(pH 8.0)中煮沸10min。
(5)待透析袋冷却，存放于4℃，应确保透析袋始终浸没在液体中。
    重要：从此步起用透析袋时一定要戴手套操作。
(6)在使用之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。
    [注]也可将透析袋放在广口瓶中充满水，松动瓶盖，于20psi(1.40 kg/cm2)高压灭菌10min代替第4步用1 mmol/L EDTA(pH8.0)煮沸10min的操作。
使用完后将透析袋浸泡在70％乙醇中以免长菌。
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11楼2009-04-02 11:25:47
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travelerchem

至尊木虫 (知名作家)
★
sunbuct(金币+1,VIP+0):欢迎交流！ 3-25 08:07
购买的透析袋会随包装附赠使用说明的
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2楼2009-03-25 00:10:53
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286293287

金虫 (小有名气)
★ ★
yusen_1982(金币+2,VIP+0):欢迎应助！ 3-25 10:59
引用回帖:
Originally posted by wyg109 at 2009-3-24 23:53:
突然要使用透析袋，之前没用过，不知道怎么样的，是不是用之前要处理阿，还要带手套，有懂的吗？麻烦给我说说原理和使用方法。我需要准备什么？

[ Last edited by zhangwj on 2009-3-25 at 00:11 ]

网上查到的一些资料，我身边有人在做透析液的检测的，最好带手套，毕竟是做试验的基本要求吧~
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，就叫做透析袋。
　　自Thomas Graham 1861年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。
　　透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
　　透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。
　　透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜，目前常用的是美国Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产的各种尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量，缩写为MwCO）通常为1万左右。
　　商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23 mm～50 mm不等。为防干裂，出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。可先用50％乙醇煮沸1小时，再依次用50％乙醇、0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明，50％乙醇处理对除去具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，若长时间不用，可加少量NaN2，以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。
　　新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗净，即可使用。使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增加50％是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。
　　检查透析效果的方法是：用1％ BaCl2检查(NH4)2SO4，用1％ AgNO3 检查NaCl、KCl等。
　　为了提高透析效率，还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制作各种简易的透析装置。美国生物医学公司（Biomed Instruments Inc.）生产的各种型号的Zeineh 透析器，由于使用对流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。
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3楼2009-03-25 10:54:13
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
★ ★
zhangwj(金币+2,VIP+0):谢谢！ 3-25 20:24
楼上哪讲的是怎么处理，我记得我回答过好几次这个问题了。
使用前处理：
1. 把透析袋剪成适当长度（10-20cm）的小段。
2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟。
3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。
5. 冷却后，存放于4度，必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。
6. 用前在透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净。
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For my life！
4楼2009-03-25 20:20:46
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