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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何做好真核转染？
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villyw

金虫 (初入文坛)

[交流] 如何做好真核转染？

RT，请教各位虫友，真核转染（lipofectAmine 2000）应该怎样才能做好呢？需要哪些注意事项呢？希望有此经验的虫友不吝赐教，谢谢！
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1楼 2009-03-24 22:27:27
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
按说明书操作就行了啊，说明书一定要看仔细，有几点要注意的。别的也没什么问题。
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2楼2009-03-25 22:01:18
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米见方ggsddu

金虫 (小有名气)

only屋里哇啦
看说明书，另外注意细胞密度，和均匀程度，用枪加入培养基或混合后的复合物时，慢速滴加
再就是操作小心不要染菌就不用多说了
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低调潜行
3楼2009-03-28 23:46:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
转RNA时细胞密度一般为50%
做一个小正交
10nM
30nM
50nM
的siRNA
以及减50%转染试剂，推荐浓度转染试剂，增50%转染试剂

可以不需要完全做很多正交，随机挑五六个出来做
但一般是，低剂量的siRNA搭配低剂量的转染试剂

48h后收蛋白跑下western看看
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4楼2009-03-29 00:05:19
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mofatuzi

新虫 (小有名气)
DNA不能加太多，否则细胞过量表达，易死
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5楼2009-03-29 22:06:35
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