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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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villyw

金虫 (初入文坛)

[交流] 如何做好真核转染?

RT,请教各位虫友,真核转染(lipofectAmine 2000)应该怎样才能做好呢?需要哪些注意事项呢?希望有此经验的虫友不吝赐教,谢谢!
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

按说明书操作就行了啊,说明书一定要看仔细,有几点要注意的。别的也没什么问题。
2楼2009-03-25 22:01:18
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米见方ggsddu

金虫 (小有名气)

only屋里哇啦

看说明书,另外注意细胞密度,和均匀程度,用枪加入培养基或混合后的复合物时,慢速滴加
再就是操作小心不要染菌就不用多说了
低调潜行
3楼2009-03-28 23:46:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

转RNA时细胞密度一般为50%
做一个小正交
10nM
30nM
50nM
的siRNA
以及减50%转染试剂,推荐浓度转染试剂,增50%转染试剂

可以不需要完全做很多正交,随机挑五六个出来做
但一般是,低剂量的siRNA搭配低剂量的转染试剂

48h后收蛋白跑下western看看
4楼2009-03-29 00:05:19
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mofatuzi

新虫 (小有名气)

DNA不能加太多,否则细胞过量表达,易死
5楼2009-03-29 22:06:35
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