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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 超声波破碎
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Allon857

新虫 (初入文坛)

[求助] 超声波破碎 已有2人参与

一升菌液得到3克菌体，破碎后纯化上清，菌体应该用多少缓冲液(我用的后面纯化用的binding buffer)溶解比较好？超声破碎应该是有一定浓度条件的，最近实验室总是破不清，不知道该用多少浓度，希望各位大神解答，谢谢！

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1楼 2018-05-25 17:13:41
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863828916

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10倍够了，也就是30ml。超声不一定能够破清吧?
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2楼2018-05-25 17:27:15
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Allon857

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 863828916 at 2018-05-25 17:27:15
10倍够了，也就是30ml。超声不一定能够破清吧?

哦哦，感觉稀了能破清，但是不利于下一步的纯化。另外破碎的时候破碎效率什么的参数能否告知一下？谢谢！

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3楼2018-05-25 17:59:53
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863828916

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Allon857 at 2018-05-25 17:59:53
哦哦，感觉稀了能破清，但是不利于下一步的纯化。另外破碎的时候破碎效率什么的参数能否告知一下？谢谢！
...

稀释10-15倍肯定足够了，稀了没什么卵用，只要别太粘稠即可。
若30ml左右的话，300w-400w即可。每次超声3s，间隔6-7s，一轮时长3min，总共超3-4轮即可。
超声要将样品管放在冰水混合物中，主要是别温度高了蛋白失活。
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4楼2018-05-25 18:10:26
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汀语言

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

什么菌啊？如果有细胞壁要加溶菌酶或溶壁酶。如果是大肠杆菌，振幅20%，超声20min，超3s,停3s够了。
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5楼2018-05-31 17:51:35
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