24小时热门版块排行榜    

查看: 4314  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

kakashi冠

铁虫 (初入文坛)

[求助] 链霉菌接合转移求助 已有3人参与

目前在做链霉菌基因敲除,接合转移这一步做了三个多月还是没见转化子生长,质粒是根据PKC1139改造的,按照经典的接合转移方法做的,对共受体数量,热激温度,铺药时间都做了梯度实验,还是没见转化子,请各位大侠帮忙分析其中可能的原因?另外,铺药浓度是按照1ml水包括50 μg/mL的安普霉素和50 μg/mL的萘啶酮酸?还是根据培养基体积(约20毫升)1ml水包含1000 μg/mL的安普霉素和1000 μg/mL的萘啶酮酸?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hd305

新虫 (初入文坛)

我用的也是基于PKC构建的敲除质粒,然后做了一个多月接合转移也一直没长出接合子,请问楼主是修改了哪些关键步骤长出来的接合子,能交流一下嘛,我纯属新手们实验室也没人做,完全自己摸索,感觉没头绪..
8楼2019-06-05 09:45:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

In_vain

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
snoopytbw: 金币+2, 鼓励交流 2018-08-05 11:16:16
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17?另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗?覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μg/mL的安普霉素和50 μg/mL的萘啶酮酸这样来的,可以长出接合子。但是我的问题的接合子纯化的时候涂在apr平板上不长,无法得到纯化的接合子,你有遇到这种情况吗?
2楼2018-06-11 11:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麻雷子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by In_vain at 2018-06-11 11:07:34
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17?另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗?覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μg/mL的安普霉素和50 μg/mL的萘啶酮酸这样来的,可以长出接合子。但是我的问 ...

你解决了嘛,我接合转移之后一直不长,不知道什么原因

发自小木虫IOS客户端
3楼2018-08-05 11:08:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 热心应助,鼓励 2018-08-14 16:34:00
也有可能是pkc1139的复制子在你那个菌里不适用。你换些复制子或者换pset152这种整合型的质粒先试试
4楼2018-08-06 09:55:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 6/300 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +6 启萌科技 2026-08-12 21/1050 2026-08-14 19:48 by 启萌科技
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-14 18:36 by 正能量1斤
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见