应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌接合转移求助
51/1返回列表
查看: 4323  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

kakashi冠

铁虫 (初入文坛)

[求助] 链霉菌接合转移求助 已有3人参与

目前在做链霉菌基因敲除，接合转移这一步做了三个多月还是没见转化子生长，质粒是根据PKC1139改造的，按照经典的接合转移方法做的，对共受体数量，热激温度，铺药时间都做了梯度实验，还是没见转化子，请各位大侠帮忙分析其中可能的原因？另外，铺药浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸？还是根据培养基体积（约20毫升）1ml水包含1000 μｇ／ｍＬ的安普霉素和1000 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-05-25 14:38:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kakashi冠

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by In_vain at 2018-06-11 11:07:34
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17？另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗？覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸这样来的，可以长出接合子。但是我的问 ...

你这个铺药的浓度太低了吧，长出来的不一定是结合子
赞一下 回复此楼
5楼2018-08-10 20:37:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

In_vain

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
snoopytbw: 金币+2, 鼓励交流 2018-08-05 11:16:16
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17？另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗？覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸这样来的，可以长出接合子。但是我的问题的接合子纯化的时候涂在apr平板上不长，无法得到纯化的接合子，你有遇到这种情况吗？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2018-06-11 11:07:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麻雷子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by In_vain at 2018-06-11 11:07:34
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17？另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗？覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸这样来的，可以长出接合子。但是我的问 ...

你解决了嘛，我接合转移之后一直不长，不知道什么原因

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2018-08-05 11:08:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 热心应助，鼓励 2018-08-14 16:34:00
也有可能是pkc1139的复制子在你那个菌里不适用。你换些复制子或者换pset152这种整合型的质粒先试试
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2018-08-06 09:55:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭