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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 链霉菌接合转移求助
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kakashi冠

铁虫 (初入文坛)

[求助] 链霉菌接合转移求助 已有3人参与

目前在做链霉菌基因敲除，接合转移这一步做了三个多月还是没见转化子生长，质粒是根据PKC1139改造的，按照经典的接合转移方法做的，对共受体数量，热激温度，铺药时间都做了梯度实验，还是没见转化子，请各位大侠帮忙分析其中可能的原因？另外，铺药浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸？还是根据培养基体积（约20毫升）1ml水包含1000 μｇ／ｍＬ的安普霉素和1000 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸？
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1楼 2018-05-25 14:38:58
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kakashi冠

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by In_vain at 2018-06-11 11:07:34
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17？另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗？覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸这样来的，可以长出接合子。但是我的问 ...

你这个铺药的浓度太低了吧，长出来的不一定是结合子
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5楼2018-08-10 20:37:25
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In_vain

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
snoopytbw: 金币+2, 鼓励交流 2018-08-05 11:16:16
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17？另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗？覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸这样来的，可以长出接合子。但是我的问题的接合子纯化的时候涂在apr平板上不长，无法得到纯化的接合子，你有遇到这种情况吗？
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2楼2018-06-11 11:07:34
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麻雷子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by In_vain at 2018-06-11 11:07:34
你做接合转移用的供体菌是ETU还是S17？另外你有筛选你的链霉菌在哪种培养基上产孢最好吗？覆盖我用的是浓度是按照1ml水包括50 μｇ／ｍＬ的安普霉素和50 μｇ／ｍＬ的萘啶酮酸这样来的，可以长出接合子。但是我的问 ...

你解决了嘛，我接合转移之后一直不长，不知道什么原因

发自小木虫IOS客户端
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3楼2018-08-05 11:08:52
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xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
snoopytbw: 金币+3, 热心应助，鼓励 2018-08-14 16:34:00
也有可能是pkc1139的复制子在你那个菌里不适用。你换些复制子或者换pset152这种整合型的质粒先试试
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4楼2018-08-06 09:55:38
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