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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 疏水层析样品电导
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

[交流] 疏水层析样品电导 已有2人参与

疏水层析，高盐吸附，低盐洗脱。
在一定范围内，盐浓度越高，样品与疏水基团结合越强。
用饱和硫酸铵调节样品电导，目的蛋白不会因为盐浓度过高而聚集么？
上样前需要过滤/离心么？如果过滤会导致聚集的蛋白被膜拦截么？
原液SDS-PAGE电泳，目的条带很浓，调完电导后的样品电泳，目的条带很淡，原因是什么，聚集沉淀，分布不均一，取上层溶液电泳？

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只有拼出来的美丽，没有等出来的辉煌！
1楼 2018-05-23 23:04:11
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.硫酸铵盐析的，硫酸铵是蛋白沉淀下来的浓度远远比疏水层析上样的浓度高出很多，疏水一般1-1.5M，而盐析时要6M以上。所以疏水层析里面加的盐不会是蛋白沉淀。
2.上样前当然要过滤，把固形物去除。过滤不是超滤，蛋白不会聚集。
3，盐的存在会影响电泳过程。
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2楼2018-05-24 09:11:09
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-24 09:11:09
1.硫酸铵盐析的，硫酸铵是蛋白沉淀下来的浓度远远比疏水层析上样的浓度高出很多，疏水一般1-1.5M，而盐析时要6M以上。所以疏水层析里面加的盐不会是蛋白沉淀。
2.上样前当然要过滤，把固形物去除。过滤不是超滤，蛋 ...

也就是说我的高盐样品中目的蛋白条带与原液相比，灰度较低，原因是高盐影响电泳么？

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只有拼出来的美丽，没有等出来的辉煌！
3楼2018-05-24 10:50:51
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
上样前肯定要过滤，过滤不加任何的东西，单纯的过筛；缓冲液电导调节（加盐）要合适，一般盐浓度都有先例参考的，太高太低效果都不好。最后的样品如果电导过高，可以脱盐，以免影响电泳。
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4楼2018-06-01 10:46:19
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