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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

[交流] 疏水层析样品电导 已有2人参与

疏水层析,高盐吸附,低盐洗脱。
在一定范围内,盐浓度越高,样品与疏水基团结合越强。
用饱和硫酸铵调节样品电导,目的蛋白不会因为盐浓度过高而聚集么?
上样前需要过滤/离心么?如果过滤会导致聚集的蛋白被膜拦截么?
原液SDS-PAGE电泳,目的条带很浓,调完电导后的样品电泳,目的条带很淡,原因是什么,聚集沉淀,分布不均一,取上层溶液电泳?

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hc-material

专家顾问 (职业作家)


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1.硫酸铵盐析的,硫酸铵是蛋白沉淀下来的浓度远远比疏水层析上样的浓度高出很多,疏水一般1-1.5M,而盐析时要6M以上。所以疏水层析里面加的盐不会是蛋白沉淀。
2.上样前当然要过滤,把固形物去除。过滤不是超滤,蛋白不会聚集。
3,盐的存在会影响电泳过程。
2楼2018-05-24 09:11:09
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2018-05-24 09:11:09
1.硫酸铵盐析的,硫酸铵是蛋白沉淀下来的浓度远远比疏水层析上样的浓度高出很多,疏水一般1-1.5M,而盐析时要6M以上。所以疏水层析里面加的盐不会是蛋白沉淀。
2.上样前当然要过滤,把固形物去除。过滤不是超滤,蛋 ...

也就是说我的高盐样品中目的蛋白条带与原液相比,灰度较低,原因是高盐影响电泳么?

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3楼2018-05-24 10:50:51
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
上样前肯定要过滤,过滤不加任何的东西,单纯的过筛;缓冲液电导调节(加盐)要合适,一般盐浓度都有先例参考的,太高太低效果都不好。最后的样品如果电导过高,可以脱盐,以免影响电泳。
4楼2018-06-01 10:46:19
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