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fxj1986

木虫 (正式写手)

从小就是好人

[求助] 蛋白不表达 已有2人参与

我们最近在实验过程中遇到了一些问题。
将外源基因进行密码子优化后,导入大肠杆菌培养诱导,利用SDS-PAGE对表达情况进行验证,但是PAGE胶上观察不到明显的蛋白条带,怀疑是蛋白没有正常表达。
大家有没有什么建议,请分享一下。谢谢。
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gaiyin1002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你有纯化试试看么,还有你连得什么载体。有些目的基因连接不同表达载体对蛋白表达影响很大。

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6楼2018-05-24 10:42:46
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普通回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

送去测个序看有没有移码突变。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2018-05-23 16:36:05
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齐国小药童

木虫 (著名写手)

我就是我,是颜色不一样的焰火
3楼2018-05-23 16:40:16
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原来,是这样

金虫 (小有名气)

这种情况见得多了,没有明显蛋白条带不代表没有表达,过柱之后弄个梯度洗脱再去跑胶看看有没有。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2018-05-23 16:42:40
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用户晓晓

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fxj1986: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2018-05-24 11:14:20
1,质粒是否经过测序验证很重要,ORF正确是最基本的。

2,是否加了标签?如果有可以做WB验证

3,跑page胶不会没有一点条带吧?要是干干净净那就是操作的问题。如果只是没有目的条带,那可能是没有表达或者也可能表达比较弱。

4,分析分析启动子是否合适。也可以做qPCR验证下。

祝试验顺利!
5楼2018-05-23 17:29:20
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fxj1986

木虫 (正式写手)

从小就是好人

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by gaiyin1002 at 2018-05-24 10:42:46
你有纯化试试看么,还有你连得什么载体。有些目的基因连接不同表达载体对蛋白表达影响很大。

谢谢您的建议
自助者天助!
7楼2018-05-24 11:15:21
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fxj1986

木虫 (正式写手)

从小就是好人

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 原来,是这样 at 2018-05-23 16:42:40
这种情况见得多了,没有明显蛋白条带不代表没有表达,过柱之后弄个梯度洗脱再去跑胶看看有没有。

谢谢您的建议
自助者天助!
8楼2018-05-24 11:15:34
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fxj1986

木虫 (正式写手)

从小就是好人

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-23 16:36:05
送去测个序看有没有移码突变。

谢谢您的建议
自助者天助!
9楼2018-05-24 11:15:50
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Crazy cat

铜虫 (小有名气)


额,能否具体一点,比如用的何种载体,用的什么宿主。。诱导条件如何?
10楼2018-05-24 17:27:22
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