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yuevis

铜虫 (小有名气)

[交流] 急问!芽孢杆菌同源重组的相关问题 已有3人参与

我做多黏芽孢杆菌同源重组敲除的实验,总是没有重组子,怀疑是不是同源臂设置的短了,请问做芽孢杆菌同源敲除一般同源臂多长可以啊?我的实验左臂470多bp,右臂510bp,可以吗?

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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


2楼2018-05-18 14:58:55
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yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2018-05-18 14:58:55
转化方法有问题

希望可以详细解答,同源臂-长度没问题是吗?转化多次试过spizizen转化法,,以及一次电转化,都么有结果。

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3楼2018-05-18 15:24:15
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young1983

木虫 (正式写手)


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Paenibacillus同源重组一般用500bp同源臂,前提是较高的转化效率。如需帮助可以联系。

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4楼2018-05-18 15:44:02
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yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by young1983 at 2018-05-18 15:44:02
Paenibacillus同源重组一般用500bp同源臂,前提是较高的转化效率。如需帮助可以联系。

一般都是500bp,会不会太短?有人和我说要在1000bp左右,甚至更长。在问一下,同源臂长短和敲除的片段长度有关吗

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5楼2018-05-18 16:18:39
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young1983

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我们一般用500bp,当然同源臂越长越有利于重组,但与目的基因长度关系不大。

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6楼2018-05-18 16:22:52
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yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by young1983 at 2018-05-18 16:22:52
我们一般用500bp,当然同源臂越长越有利于重组,但与目的基因长度关系不大。

那请问你们一般转化用什么方法?,重组效率大概多少?

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7楼2018-05-18 16:52:21
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young1983

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by yuevis at 2018-05-18 16:52:21
那请问你们一般转化用什么方法?,重组效率大概多少?
...

电转,效率约10的8次方每微克DNA

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8楼2018-05-18 18:42:54
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yuevis

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by young1983 at 2018-05-18 18:42:54
电转,效率约10的8次方每微克DNA
...

不知道能否告知您的转化方法?

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9楼2018-05-18 18:46:25
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young1983

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by yuevis at 2018-05-18 18:46:25
不知道能否告知您的转化方法?
...

可以帮忙转化

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10楼2018-05-18 18:55:04
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