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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 农杆菌侵染油菜，放进筛选培养基还有农杆菌菌落
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summerdayl

新虫 (初入文坛)

[交流] 农杆菌侵染油菜，放进筛选培养基还有农杆菌菌落 已有2人参与

想求助一下，为什么放进筛选培养基了还有农杆菌菌落长出来，有Carbencillin（500mg/L）和Hygromycin（25mg/L）两种抗生素了，前者是杀死农杆菌，后者是杀死未转化植物，植株没有一颗有要死掉的迹象，但是查文献发现别人做的相同植物相同质粒用的两种抗生素的浓度并不低了。怎么办啊，着急。。。
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1楼 2018-05-17 07:40:06
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用户晓晓

木虫 (正式写手)
★
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显然你这抗生素 或者添加方法有问题啊~~~农杆菌没有杀死完吧  还有可能，，，但是你这所有的植株都是Hygromycin抗性植株那就有点不可思议了，你这个转化效率也忒高了点~~~

建议做实验要多设置对照组。（设置一个只有农杆菌的组，验证下你的Carbencillin有没有问题，再设置一个未转化农杆菌的正常植物组，看看你的Hygromycin这个有没有问题）

祝试验顺利~
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2楼2018-05-17 10:14:42
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summerdayl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 用户晓晓 at 2018-05-17 10:14:42
显然你这抗生素 或者添加方法有问题啊~~~农杆菌没有杀死完吧  还有可能，，，但是你这所有的植株都是Hygromycin抗性植株那就有点不可思议了，你这个转化效率也忒高了点~~~

建议做实验要多设置对照组。（设置一个 ...

对，这也是我纳闷的一点，我看文献，大家转化率就是30%左右。。。我感觉是因为我的OD 值太高了，农杆菌的浓度高，所以一直有菌吧。谢谢您
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3楼2018-05-24 05:49:36
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一叶知秋365

新虫 (小有名气)
★
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推荐一种抗生素，特美汀。抑制农杆菌效果还不错。另外hyb可以试试40mg/l。或者耐心等待，有时候筛选没那么快。

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4楼2018-05-30 10:39:16
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summerdayl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一叶知秋365 at 2018-05-30 10:39:16
推荐一种抗生素，特美汀。抑制农杆菌效果还不错。另外hyb可以试试40mg/l。或者耐心等待，有时候筛选没那么快。

嗯，检查了一下之前是因为侵染的农杆菌浓度太高了。所以一直都很多农杆菌杀不死。现在调整了OD值，已经杀死了，但是植物全死了
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5楼2018-06-06 11:26:44
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一叶知秋365

新虫 (小有名气)
★
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5楼: Originally posted by summerdayl at 2018-06-06 11:26:44
嗯，检查了一下之前是因为侵染的农杆菌浓度太高了。所以一直都很多农杆菌杀不死。现在调整了OD值，已经杀死了，但是植物全死了...

侵染浓度只要不是太高也没事，一，侵染后用无菌滤纸一定要吸干表面菌液。二，共培养不要等菌长的太多再洗然后转到筛选培养基上，看着有淡淡的菌斑就开始了。

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6楼2018-06-13 18:09:05
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summerdayl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 一叶知秋365 at 2018-06-13 18:09:05
侵染浓度只要不是太高也没事，一，侵染后用无菌滤纸一定要吸干表面菌液。二，共培养不要等菌长的太多再洗然后转到筛选培养基上，看着有淡淡的菌斑就开始了。
...

对，我现在已经用滤纸了，但是还是会长啊，只是不像之前那么猖狂了，有人推荐我把滤纸直接放在培养基上，这样可以吗？弱弱在问一句，可以有你的微信不？
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7楼2018-07-20 13:06:21
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