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cjw_0926

新虫 (初入文坛)

[求助] 从BL21菌当中提取质粒,但质粒浓度一直很低而且有被降解,这该怎么办? 已有2人参与

对质粒的信息也不是很明确,浓度一直很低,于是加大菌量到了200ml,但浓度上去了可是琼脂糖电泳还是没有条带,最近用了康为的试剂盒,浓度达到了3000ng,跑胶出现两条带,我将它转化top10感受态细胞,然后在抗性板上长满了,太诡异了。求各位虫友帮忙分析一下!谢谢!
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匿名

用户注销 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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3楼2018-05-15 21:28:55
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

首先对你提取的质粒按照你已知信息验证一下,质粒转化长满平板很正常,只要正确,那挑去1-2个克隆提质粒就可以了。

发自小木虫Android客户端
2楼2018-05-15 15:25:14
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
BL21一般用于蛋白表达,质粒拷贝数很低,不适合于质粒提取,浓度确实会很低。
推测你是没有相应克隆菌株的菌种,所以才想从BL21中提取吗?如果这样,确实建议先回转DH5a等菌株,然后提质粒进行鉴定,回转的时候长出的菌斑数量跟你加入的质粒量正相关,加的太多肯定会长的很多,不奇怪,也不必担心。
祝好!
4楼2018-05-16 17:37:34
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)


换下purimag的磁珠法质粒提取试剂盒试试

发自小木虫IOS客户端
5楼2018-05-21 22:55:14
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