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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 从BL21菌当中提取质粒，但质粒浓度一直很低而且有被降解，这该怎么办？
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cjw_0926

新虫 (初入文坛)

[求助] 从BL21菌当中提取质粒，但质粒浓度一直很低而且有被降解，这该怎么办？ 已有2人参与

对质粒的信息也不是很明确，浓度一直很低，于是加大菌量到了200ml，但浓度上去了可是琼脂糖电泳还是没有条带，最近用了康为的试剂盒，浓度达到了3000ng，跑胶出现两条带，我将它转化top10感受态细胞，然后在抗性板上长满了，太诡异了。求各位虫友帮忙分析一下！谢谢！
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1楼 2018-05-15 09:10:27
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
首先对你提取的质粒按照你已知信息验证一下，质粒转化长满平板很正常，只要正确，那挑去1-2个克隆提质粒就可以了。

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2楼2018-05-15 15:25:14
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匿名

用户注销 (正式写手)
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3楼2018-05-15 21:28:55
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
BL21一般用于蛋白表达，质粒拷贝数很低，不适合于质粒提取，浓度确实会很低。
推测你是没有相应克隆菌株的菌种，所以才想从BL21中提取吗？如果这样，确实建议先回转DH5a等菌株，然后提质粒进行鉴定，回转的时候长出的菌斑数量跟你加入的质粒量正相关，加的太多肯定会长的很多，不奇怪，也不必担心。
祝好！
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4楼2018-05-16 17:37:34
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)
换下purimag的磁珠法质粒提取试剂盒试试

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5楼2018-05-21 22:55:14
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