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草哥cium新虫 (正式写手)
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[求助]
高保真酶TA克隆
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大神们，我把高保真酶的dna产物切胶纯化了，取了5ul 再加了5ul普通tap酶，72度10分钟，拿出来直接连接T载行不行呀。。。现在看上去都是绿色的连接产物。。 第一次做求解呀。。 @biostar2009 发自小木虫Android客户端 |
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-10 07:55:44
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-05-10 07:55:44
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Taq酶加buffer没，按照正常反应比例加上镁离子和dNTP，72度反应30分钟，产物直接连T载体 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-05-10 02:10:24
渊博震天
版主 (职业作家)
Yeast Display
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-05-10 07:55:31
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-05-10 07:55:31
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我没这样做过，我做的都是切胶回收之后加同体积普通taq酶72℃延伸10min，之后用pcr产物纯化试剂盒纯化后根据合理体系进行TA克隆。你的5ul连接产物浓度怎么样？有没有跑个胶看看，如果浓度低也不好连。 不知道可不可以直接拿加尾液直接连的，等等做过的前辈来回答吧。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2018-05-09 22:36:18
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3楼2018-05-09 22:56:45
草哥cium
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5楼2018-05-10 07:55:26