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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC检测样品，浓度稀释了10倍的样品，测出来的峰面积却不是10倍的关系
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leehangwei

新虫 (小有名气)

[求助] HPLC检测样品，浓度稀释了10倍的样品，测出来的峰面积却不是10倍的关系 已有4人参与

HPLC检测样品，浓度稀释了10倍的样品，测出来的峰面积却不是10倍的关系，我测的是草酸

@鸭绿江畔 @superyeast @wyy080214 @klicking @学术巨星 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-05-09 21:51:04
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飞旒

银虫 (小有名气)
可能不在线性范围内了

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leehangwei
只要思想不滑坡，办法总比问题多
2楼2018-05-10 07:53:40
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飞旒

银虫 (小有名气)
也可能是柱子填料不合适，对酸性物质分离随酸性不同而改变

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只要思想不滑坡，办法总比问题多
3楼2018-05-10 07:56:44
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leehangwei

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞旒 at 2018-05-10 07:53:40
可能不在线性范围内了

我想可能会不会是因为纯度不够，其他和草酸相似的物质在液相中保留时间与草酸接近，然后稀释之后峰面积没有按预想的变为之前的十分之一

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4楼2018-05-11 09:10:30
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t892893235

木虫 (著名写手)

范德姆特大对勾

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
方法问题，峰不纯？？
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

leehangwei
5楼2018-05-11 16:43:21
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leehangwei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by e_liang369 at 2018-05-11 18:06:57
几分钟出峰？是否在溶剂峰处出峰？是否有其他干扰？

草酸出峰时间和乙醛酸，乙醇酸都是非常近的吧

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10楼2018-05-16 20:07:35
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yangnannoo1

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

浓度和峰面积需要制作标准曲线才能确定关系吧，应该多做几组浓度，这样直接稀释10倍找关系的方法是有问题的。
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12楼2018-05-17 14:29:07
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leehangwei

新虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 繁夏 at 2018-05-11 17:28:51
稀释出来是多少？

2.5分钟出的峰，这个时间是死时间吗，我的样品不够纯，杂质比较多，我想如果是因为色谱柱对里面的几种物质没有保留，草酸和其他的产物一起出峰，是不是也会导致这种结果。我想问一下，如果发文章的话，编辑会不会看到我的保留时间是2.4分钟就会认为这个草酸根本没分离开，算得结果是不准确的

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13楼2018-05-17 19:32:35
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繁夏

版主 (知名作家)

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引用回帖:
13楼: Originally posted by leehangwei at 2018-05-17 19:32:35
2.5分钟出的峰，这个时间是死时间吗，我的样品不够纯，杂质比较多，我想如果是因为色谱柱对里面的几种物质没有保留，草酸和其他的产物一起出峰，是不是也会导致这种结果。我想问一下，如果发文章的话，编辑会不会看 ...

你跑几个草酸梯度，看看峰面积变化，来区别是不是溶剂峰

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14楼2018-05-17 20:51:56
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繁夏

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
15楼: Originally posted by leehangwei at 2018-05-18 00:54:37
我做草酸的标准曲线拟合的还比较好，相关系数0.996左右，我想会不会这样，即使草酸没有被保留，但是检测器依然可以在210nm下检测到不同浓度的草酸，峰面积也是线性的。
...

配个基标，看一下峰面积，看看是不是有杂质干扰

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16楼2018-05-18 08:25:25
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繁夏

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
16楼: Originally posted by 繁夏 at 2018-05-18 08:25:25
配个基标，看一下峰面积，看看是不是有杂质干扰
...

草酸你扫个紫外，看一下最大吸收，210干扰比较多

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17楼2018-05-18 08:31:28
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leehangwei

新虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by 一水间22 at 2018-05-21 15:07:13
想问楼主，您是用外标法检测样品中的草酸
含量吗？

是的，不过之前没意识到死体积这个概念，两分多钟出的峰

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19楼2018-05-21 20:53:57
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普通回帖

繁夏

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主
稀释出来是多少？

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6楼2018-05-11 17:28:51
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
几分钟出峰？是否在溶剂峰处出峰？是否有其他干扰？
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悲催的研发！
7楼2018-05-11 18:06:57
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leehangwei

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by t892893235 at 2018-05-11 16:43:21
方法问题，峰不纯？？

感觉很有可能，流速是1mL/min，如果调小流速的话，峰宽会不会就变宽了

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8楼2018-05-16 20:06:17
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leehangwei

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 繁夏 at 2018-05-11 17:28:51
稀释出来是多少？

稀释完以后峰面积1w4，没稀释的2w8

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9楼2018-05-16 20:06:59
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