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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ELISA检测方法对抗原蛋白的纯度要求高吗
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yfh20046

金虫 (正式写手)

[求助] ELISA检测方法对抗原蛋白的纯度要求高吗

现在准备建立一个新城疫抗体的特异性ELISA检测方法，想咨询一下，原核表达出来的抗原蛋白的纯度大概在百分之多少之上才能发生特异性反应，能建立ELISA方法啊？80%、90%?还是只能蛋白纯化出来挨着一个一个试 啊？目前生物公司给出的蛋白合成的报价 不同，纯度越高费用越高，想了解一下多大纯度能满足要求
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1楼 2018-05-07 17:23:03
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wuhu0612331

铜虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-07-31 21:51:51
90%纯度已经很高了，原核表达应该很容易，主要看你的蛋白是否可融，有没有翻译后修饰，有修饰最好用真核蛋白，真核就很贵。

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yfh20046
2楼2018-05-07 19:03:52
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yfh20046

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-07 19:03:52
90%纯度已经很高了，原核表达应该很容易，主要看你的蛋白是否可融，有没有翻译后修饰，有修饰最好用真核蛋白，真核就很贵。

非常感谢，我发上来蛋白序列 ，你能帮我看一下 有没有修饰吗 ？
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3楼2018-05-08 14:06:38
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yfh20046

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2018-05-07 19:03:52
90%纯度已经很高了，原核表达应该很容易，主要看你的蛋白是否可融，有没有翻译后修饰，有修饰最好用真核蛋白，真核就很贵。

MDRAVSQVALENDEREAKNTWRLIFRIAILFLTVVTLAISVASLLYSMGASTPSDLVGIPTRI
SRAEEKITSTLGSNQDVVDRIYKQVALESPLALLKTETTIMNAITSLSYQINGAANNSGWGAP
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4楼2018-05-08 14:12:36
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Jack1508

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2018-07-31 21:52:20
elisa效价的其实和蛋白的纯度关系不大，如果发生特异性反应，哪怕只有50%的纯度都可以。保险起见一般在80%以上吧。。光看序列还真的看不出是否修饰了，除非已经有通过文献确认的。特别是原核表达系统中，修饰的可能性很小，但是也不是说没有。

你是不是要弄一个类似检测试剂盒一类的东西啊。如果是的话，其实关键的还是抗体啊。
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yfh20046
5楼2018-05-10 16:50:21
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yfh20046

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by Jack1508 at 2018-05-10 16:50:21
elisa效价的其实和蛋白的纯度关系不大，如果发生特异性反应，哪怕只有50%的纯度都可以。保险起见一般在80%以上吧。。光看序列还真的看不出是否修饰了，除非已经有通过文献确认的。特别是原核表达系统中，修饰的可能 ...

好的 谢谢
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6楼2018-07-31 15:30:02
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