| 查看: 1410 | 回复: 3 | ||
[求助]
引物设计添加信号肽，求助大神们！！！
|
|
各位大神，我的老板最近想要在我们设计的引物上添加信号肽，使目的蛋白表达为信号肽（我们蛋白原本为包涵体蛋白）。 我查了一些资料，现在有几个问题，望大神们能帮帮忙~~ 1.有的资料说含有信号肽引物设计时，应当是“保护碱基+ATG+信号肽+ATG+目的序列”，应当是这样吗？两个起始子是否会影响我的目的蛋白的表达？或者可以添加在下游终止子前面？ 2.对于信号肽序列，是根据什么要求在引物中添加呢？是否是信号肽序列就可以？部分资料中的信号肽序列都好长啊~，如果按照这个要求设计引物，势必会对上下游引物的退火温度等相关数据产生影响，而且会影响PCR的结果，是否有相关方法可以避免呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有223人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
Congcongaha
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 644.2
- 红花: 1
- 帖子: 136
- 在线: 59.9小时
- 虫号: 4173216
- 注册: 2015-10-25
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
2楼2018-05-07 12:46:48
memorize1991
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 4179.2
- 散金: 500
- 红花: 4
- 帖子: 609
- 在线: 129.5小时
- 虫号: 3623577
- 注册: 2015-01-02
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2018-05-08 07:56:39
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2018-05-08 07:56:39
|
不太明白你的意思，做分泌蛋白表达的话是根据你的表达系统的。我们实验室做真核表达体系，一般用哺乳动物的信号肽，如果你用原核生物表达当然就用原核生物的信号肽了。如果你蛋白本身为包涵体蛋白你分泌表达不会影响它正常的结构吗？添加信号肽你用重叠PCR就行，先重叠P出信号肽，然后用酶切酶连的方式放到起始密码子前，真核生物的话，在信号肽后会放一段Kozak序列用来增强表达。至于你说的保护碱基一般用6到8个，反正便宜，我们一般都用8个，这只是用来方便酶切后把信号肽连上载体上的，平末端的话，你只需要一半就行，不用加保护碱基。真核生物信号肽就100多核苷酸吧，不是很多吧分成几段重叠延伸很容易就出来了。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2018-05-08 00:20:30
4楼2018-05-09 11:21:23
